高效液相色谱法方法原理.pptx

高效液相色谱法方法原理

汇报人：XXX

2024-01-26

Contents

目录

高效液相色谱法简介

方法原理

高效液相色谱法的技术分类

高效液相色谱法的操作条件

高效液相色谱法的实验设计

高效液相色谱法的应用实例

高效液相色谱法简介

01

定义与特点

定义

高效液相色谱法（HPLC）是一种分离和分析复杂样品中各种化合物的技术。

特点

高分离效能、高灵敏度、高选择性，适用于分析高沸点、热不稳定、强极性和离子型化合物。

20世纪60年代初，起源自柱色谱和纸色谱的局限性。

起源

发展

现状

经历了常规高压液相色谱、快速高压液相色谱、微柱液相色谱等阶段。

已成为化学、生物化学、医学等领域中重要的分离分析方法。

03

02

01

发展历程

用于药物的分离、纯化和含量测定。

药物分析

用于食品中农药残留、添加剂、营养成分等的检测。

食品分析

用于水、土壤、空气等环境样品中有机污染物的检测。

环境分析

用于蛋白质、核酸、糖类等生物大分子的分离和检测。

生物分析

应用领域

方法原理

02

基于分子间的吸附和溶解性质差异实现分离

高效液相色谱法利用不同物质在固定相和流动相之间的吸附和溶解性质差异进行分离。

分离过程受物质性质影响

物质的分子极性、官能团、分子大小和形状等因素都会影响其在固定相和流动相之间的分配系数，从而影响分离效果。

选择合适的固定相和流动相是关键

根据待分离物质的性质选择合适的固定相和流动相，可以提高分离效果和效率。

分离原理

在高效液相色谱法中，泵产生高压，使流动相通过色谱柱。压力的稳定性和梯度是保证分离效果和准确性的重要因素。

流动相的流量直接影响分离时间和分辨率。选择合适的流量，可以在保证分离效果的同时提高分析效率。

压力与流量

流量

压力

固定相是色谱柱中的填料，根据待分离物质的性质选择不同的固定相，实现物质在固定相和流动相之间的吸附和溶解平衡。

固定相

流动相是携带待分离物质通过色谱柱的介质，其性质影响物质在固定相中的吸附和溶解行为，从而影响分离效果。

流动相

固定相与流动相

检测器的作用

01

检测器是高效液相色谱法的关键部分，用于检测流动相中待测物质的含量。

常见检测器类型

02

紫外-可见光检测器、荧光检测器、电导检测器等。不同检测器根据待测物质的特定性质进行选择性检测。

检测原理

03

以紫外-可见光检测器为例，其利用待测物质对紫外光的吸收特性进行定量检测；荧光检测器则是利用待测物质受激发后发出的荧光进行定量检测。

检测器原理

高效液相色谱法的技术分类

03

反相高效液相色谱法是利用非极性固定相和极性流动相之间的作用力实现分离的。非极性固定相通常为硅胶或聚合物，极性流动相为水、甲醇、乙腈等。在反相色谱中，极性弱的组分更容易被固定相吸附，因此会比极性强的组分先流出。

原理

反相高效液相色谱法广泛应用于药物、蛋白质、核酸等生物分子的分离和纯化，也用于食品、环境等领域的分析检测。

应用

反相高效液相色谱法

原理

正相高效液相色谱法是利用极性固定相和极性流动相之间的作用力实现分离的。极性固定相通常为硅胶或氨基硅胶，极性流动相为水、甲醇、乙醇等。在正相色谱中，极性强的组分更容易被固定相吸附，因此会比极性弱的组分先流出。

应用

正相高效液相色谱法主要用于分离和纯化极性物质，如糖类、醇类、胺类等，也用于一些药物和手性分子的分离。

正相高效液相色谱法

VS

离子交换高效液相色谱法是利用离子交换剂作为固定相，根据离子间的相互作用实现分离的。离子交换剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂，分别与带正电荷和负电荷的离子结合。流动相中含有所需离子的溶液通过交换剂时，与固定相中的离子进行可逆交换，从而实现分离。

应用

离子交换高效液相色谱法广泛应用于生物分子（如氨基酸、肽、蛋白质）、无机离子和金属离子的分离和纯化，也用于食品、环境等领域中的分析检测。

原理

离子交换高效液相色谱法

体积排阻高效液相色谱法是利用多孔固定相的孔径大小实现分离的。大分子物质不能进入固定相的孔径中，而小分子物质可以进入，从而实现大分子物质的分离。体积排阻色谱的分离效果取决于分子的大小和形状。

体积排阻高效液相色谱法主要用于大分子物质的分离和纯化，如蛋白质、多糖、核酸等生物分子，也用于合成聚合物的分析和分离。

原理

应用

体积排阻高效液相色谱法

高效液相色谱法的操作条件

04

根据样品性质选择流动相

流动相的选择应与样品的性质相匹配，以提高分离效果和减少杂质干扰。

流动相的预处理

对于某些特殊样品，流动相可能需要经过预处理，如过滤、脱气、离子交换等，以确保良好的分离效果和实验稳定性。

流动相的选择与处理

柱温的选择

柱温的改变可以影响溶质的扩散系数、分配系数和吸附能力，进而影响分离效果。选择合适的柱温可以提高分离效率和实验稳定性。

柱温对分离效果的影响

柱温的控