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临床微生物实验室必须进行规范化革命 张秀珍 卫生部北京医院 人类面临着微生物的挑战, 要打赢这场战争不仅需要有经验的医生,还需要一支优秀的侦察队伍—临床微生物检验队伍。临床细菌室规模和发展速度与10年或20年前相比已经发生了巨大的变化,但离CLSI(临床实验室标准化研究所)标准化文件要求还相差很远,基层细菌室必须进行规范操作革命才可能应对微生物向人类的挑战,才能适应临床的需要。 参考CLSI 文件从以下7方面提出建议 标本采集和运送的基本规范； 培养前标本质量检测基本规范； 标本分离的基本规范 细菌鉴定基本规范； 细菌药物敏感试验基本规范； 实验室质量保证基本规范； 细菌报告基本规范； 一.标本采集和运送 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键 但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处,造成的后果是: 临床医生最不能接受的问题:阳性率低、标本污染 棉花纤维 + 竹 /木条 抑 菌 区 是 因 为 ： 植 物 分 泌 出 来 的 ： 脂 肪 酸 ； 树 脂 ； 福 尔 马 林 氯气 ， 重金属与胶水的影响 美国与欧洲对实验室的新要求 1.痰标本的采集和运送 1. 标本采集时间：用抗生素前 2. 采集方法： 自然咳痰：必须用请水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰，于灭菌容器中或输送培养基中。 支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基 2.泌尿标本 1．采集后的标本应立即送检。 2．采集时间：多数药物从尿道排泄，所以不管用哪种方法都应在用药前采集。应采集早晨第一次的尿。 3 标本管不应含防腐剂和消毒剂。 泌尿标本 4.采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。 5.长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。 6. 做厌氧培养时应膀胱穿刺采集尿。 3.分泌物 1. 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。 2. 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应应用输送培养基。 4.便标本 1.采集时间：腹泻患者应在用药前、急性期采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内采；厌氧菌出现症状即采集。 2.采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有脓血和黏液的部位的粪便2-3克，如液状粪便取絮状物盛于无菌的、密封的、不吸水的、容器内或直接盛于增菌液或保存液中；对不易获得粪便患者及幼儿，可用直肠拭子采集后置保存液或输送培养基中送检。 便标本 ???注意事项： ⑴虽然粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。 ⑵在患者病情许可的条件下应在用药前采集标本。 ⑶应床边接种或置输送培养基送检。 ⑷厌氧细菌（难辩梭菌）培养的标本应尽量减少与空气接触。 5.厌培养标本 1.痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不能用于厌氧培养。 2.尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养 3．便标本厌氧培养标本采集： 可用排出的便做厌氧培养但也应少与空气接触。 6.血液及骨髓标本 1.?采血时间：尽可能在用抗生素前，心内膜炎例外。 2. 采血量：采一次或采一瓶是错误的，至少应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少于16-20ml，先将10ml注入需氧瓶，再将剩余血采血注入厌氧瓶。 3. 采血方法：不要与血气和血沉标本一起采血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采血。 血液及骨髓标本 4.?采血间隔：如第一次采集2套（4瓶）血培养标本，在以后的2-5天不必采血，但除外心内膜炎和导管相关性败血症。 5.? 儿童：采血量是总血量的1%。 6.?延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱，放常温，尽早送往临床细菌室。 7.?皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。 抽血量和体重的关系 二.标本培养前的基本规范 1.痰培养标本 实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色，当在低倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25个每视野时应作为不宜做培养的标本； 当白细胞小于10个每视野，上皮细胞小于25个每视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断。 痰培养标本 当标本中细菌种类超过3种以上，未见到钎毛拄状上皮细胞，作为不合格标本；如见到数量不等的白血胞或钎毛拄状