[生物工程精品] 粗毛栓菌漆酶的初步分离与纯化 本科毕业论文[相关表格].doc

本科生毕业设计开题报告 毕业论文题目 粗毛栓菌漆酶的初步分离与纯化 题目类型 实验 题目来源 指导教师拟定 院（系） 生命科学系 专 业 生物工程 指导教师 职 称 教授 姓 名 年 级 06级 学 号 一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等) 漆酶（Laccase, EC 1.10.3.2）是一种含铜离子的多酚氧化酶，最早发现于日本紫胶漆树 Rhus vernicifera 的浸出液中，现已证实一些高等真菌(主要是白腐真菌)也能分泌漆酶。白腐真菌是生物圈中木质素、纤维素和半纤维素的重要降解者，其分泌的漆酶在木质素降解过程中起着重要作用。漆酶可与多种底物作用，在有机合成、生物检测、免疫检测、有毒化合物的消除、生物传感器制作、制浆造纸废水处理、纸浆生物漂白和饮料加工、食药用菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面具有广阔的应用前景和潜在应用价值。多年来，已对漆酶及其产生菌进行了广泛研究，内容涉及菌株生长特性、漆酶的合成调控、酶的分离纯化和酶学性质等多个方面。现已有近百种不同来源的漆酶被分离纯化并进行了酶学性质研究，一些漆酶基因已被克隆测序，有的还在酵母等真核生物内实现异源表达，但选育新的漆酶产生菌，优化其产酶条件仍是提高漆酶产量的一条重要途径和今后一段时期内研究的热点。 本研究所用粗毛栓菌Trametes gallica Fr. 是一种能够分泌漆酶的白腐真菌，可降解麦草木质纤维素。 二、研究的主要内容及预期目标 1、本文主要测定了粗毛栓菌在一种以麦草粉为诱导物的培养液中的产漆酶情况，并对酶的一些基本性质进行了研究，以便为其在生产中的应用提供理论依据。 2、对粗毛栓菌产漆酶的诱导、酶的分离纯化及其部分性质进行初步研究。 3、对粗毛栓菌漆酶进行纯化, 并对性质进行探讨, 以便为木质素的降解的研究提供一定的科学依据, 同时为在造纸工业和环保工业上的应用提供一定的理论依据。 三、研究方案（思路） 1、产酶培养基的制备。 2、浸提漆酶。 3、对提取的粗酶进行超滤浓缩。 4、对粗菌液盐析、除去盐离子。 5、透析：除去其他大分子物质。 6、离子交换柱层析：收集有酶活力的部分。 7、测定收集的酶的活力。 四、论文进度安排 1、3月25日，产酶培养基的制备。 2、4月26日，粗酶液的浸提。 3、4月27日，对粗酶液的超滤浓缩。 4、4月29日，盐析。 5、4月30日，透析。 6、5月1日，离子交换柱对漆酶的柱层析。 7、5月4日，漆酶活性测定。 五、主要参考文献 [1] 朱陶，赵永芳. 2002,粗毛栓菌漆酶的分离纯化及部分性质研究，武汉大学学报（理学版）. 209-212. [2] Chistropher F. Thurstor. 1994, The Struture and Function of Fungal Laccase[J]. Microbiology, 140;19-26. [3] Bourbonnais R, Paice M G, et al. 1990, Oxidation of Nonphenic Substrates[J]. FEMS lett, 267;99-103. [4] 北京大学生物系生物化学教研室. 1991. 生物化学实验指导. [5] 王秀奇，秦淑媛，高天慧，颜卉君. 1999. 基础生物化学实验（第二版） [6] 卢圣栋主编现代分子生物学实验技术.1999年12月第二版.中国协和医科大学出版社. [7] 周易勇. 1993，中国生漆. 11（1）:11-13. [8] ，任少亭，毕瑞明. 2002粗毛栓菌降解麦草木质纤维素的实验研究, 微生物学杂志22（1）：24-26 Bradford MIN. 1976 ,A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye biding[J]. Analytical Biochemistry, 72 (0): 248-254. [11] 张敏，肖亚中，龚为民.2003，真菌漆酶的结构与功能[J]，生物学杂志， 20（5）：6-8 六、指导教师意见 方案设计可行。 指导教师签名： 年 月 日 七、院（系）审核意见 负责人签名（院系公章）： 年 月 日 本科生毕业设计（论文）任务书 设计（论文）题目