55株芽孢杆菌16SrRNA基因序列测定与系统发育学分析.pdfVIP

维普资讯 FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES 55株芽孢杆菌 16SrRNA基因序列测定与系统发育学分析 程 池 刘光全 李金霞 姚 粟 (中国工业微生物菌种保藏管理中心，中国食品发酵工业研究院，北京 ，100027) 摘 要 采用 16SrRNA基 因序列分析法对 中国工业微生物菌种保藏管理 中心(CCIC)保藏的55株枯草芽孢杆 菌 (Bacillussubtilis)进行复核鉴定 。菌株经纯化培养 。以改良CTAB法提取总DNA，采用细菌 16SrRNA通用 引物、TD-PCR方法(touchdoWFI—PCR)进行 16SrRNA基 因序列扩增 ，PCR产物纯化后直接进行序列测定，序列经 人工校对后用 ClustalX进行 比对分析 ，最后用 MEGA3．1软件构建系统发育树 。系统发育分析结果表 明：55株 枯草芽孢杆菌 中有 52株菌种与原鉴定结果一致 ，有 3株菌种与原鉴定结果存在差异，其 中2株鉴定结果为 巨大 芽孢杆菌 (B．megaterium)，另 1株鉴定结果为地衣芽孢杆菌 (B．1icheniformis)。 关键词 枯草芽孢杆菌，16SrRNA基 因，TD-PCR，序列分析 ，系统发育树 枯草芽孢杆菌是一种重要的工业微生物菌种 ，其 str．168)全基因组序列测定由法国巴黎巴斯德研究 应用历史可追溯到一千多年前，日本在平安时代(794 所的Bolotin等人于 1997年完成 ，该基因组序列全长 ～ 1192年)就开始利用枯草芽孢杆菌采用固态发酵 4．2M bp，GC含量为 43％，包含 了4100个编码基 的方法生产纳豆 ，开创 了利用枯草芽孢杆菌 的历 因，共有 5个 16SrRNA基因拷贝 2j。 史…。枯草芽孢杆菌也是最早被研究的模式生物之 本研究采用 16SrRNA基因序列分析法对 CICC 一 ， 1835年被命名为 “Vibriosubtilis”，1872年正式 保藏的55株枯草芽孢杆菌进行了复核鉴定。系统发 更名为 “Bacillussubtilis”2j，并一直延续使用至今 。 育学分析结果表明，有 52株菌种与原鉴定结果一致 ， 枯草芽孢杆菌具有生长速度快 ，代谢产物丰富，可利 3株菌种与原鉴定结果存在差异 ，其中2株属于 巨大 用开发价值高以及食用安全等显著优点，在过去的一 芽孢杆菌 (B．megaterium)、1株属于地衣芽孢杆菌 百多年中，其在发酵工业 、农业生物防治、医药生产、 (B．1icheniformis)。 环境保护 、饲料添加剂 、保健食 品、能源开发 、工程菌 1 材料与方法 等方面的应用有 了长足的进步和发展 ，国家农业部 1999年将枯草芽孢杆菌列入 《允许使用 的饲料添加 1．1 实验菌株 剂品种 目录》。近年来 ，分子生物学手段和技术的发 实验所用菌株共 55株 ，均为 CICC保藏 。各 展使得枯草芽孢杆菌的研究利用进入了新时期 ，第 1 菌株相关信息如表 1所示 。 株枯草 芽孢杆 菌 (Bacillussubtilissubsp．subtilis 表 1 实验所用菌株 第一作者 ：学士 ，教授级高工 。 *国家科技基础条件平 台建设项 目(2005DKA21204) 收稿 日期 ：2006—08—04 2006VO1．32NO 10(Iotal226) 维普资讯 m ¨ ¨ ¨ 博