子痫前期外周血免疫相关基因的差异表达_临床医学论文.docVIP

子痫前期外周血免疫相关基因的差异表达_临床医学论文 子痫前期外周血免疫相关基因的差异表达_临床医学论文 作者：孙波 郑桂琴 赵卫华 高素清 张为远 【摘要】 目的 了解子痫前期患者外周血免疫相关基因的差异表达，探索其与子痫前期发病的关系。方法 选择4例重度子痫前期患者为研究对象，以4例正常妊娠妇女为对照，应用基因芯片技术检测两组孕妇外周血差异基因表达谱，了解子痫前期外周血免疫相关基因的异常表达。结果 在所检测的21000个基因中，出现2次重复一致差异表达的免疫相关基因共有33个，子痫前期组差异表达上调基因23个，下调基因10个。结论 免疫相关基因的差异表达可能是子痫前期发病的原因之一。 【关键词】 子痫前期 差异表达 寡核苷酸序列分析 基因 免疫 　【Abstract】Objective To investigate the differential expression of immunity-related genes in peripheral blood leucocytes between preeclampsia and normal pregnancy cases, and to explore the pathogenesis of preeclampsia. Method The differential gene expression files of 4 severe preeclampsia and 4 normal pregnancy cases were studied using cDNA array technique in order to identify the differential expression of immunity-related genes. Results 33 differentially expressed immunity-related genes had the concordance in at least 2 cases among total 21000 genes. 23 genes were up-regulated and 10 were down-regulated. Conclusions Differential expression of immunity-related genes in peripheral leucocytes from preeclampsia may be responsible for the molecular mechanism of preeclampsia . 　　【Key words】Preeclampsia Differential expression Oligonucleotide array sequence analysis Gene Immunity 　　子痫前期是一种常见的妊娠并发症，是导致孕产妇和围生儿死亡的重要原因之一，其病因及发病机制至今仍未完全阐明。已有的大量研究表明免疫因素在子痫前期的发病中起重要作用。作者自2007年7月至2008年7月应用基因微阵列技术对子痫前期外周血白细胞基因进行平行、大规模、高通量的分析，了解子痫前期患者外周血免疫相关基因表达的变化，以寻找差异基因与子痫前期发病机制之间可能的内在联系。现报告如下。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　选择重度子痫前期患者4例为研究对象，子痫前期的诊断标准依照乐杰主编《妇产科学》第六版的标准。选择4例同期正常妊娠妇女为对照组，无妊娠期高血压病史及家族史。两组孕妇均为中国汉族妇女，单胎初孕妇，年龄、孕周、职业分布均衡，体重指数接近，无糖尿病、原发性高血压病史，无风湿、类风湿、红斑狼疮等自身免疫相关疾病，排除心、肝、肾及甲状腺疾病。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 外周血白细胞的分离 　　提取病例组及对照组肘静脉新鲜全血15ml，立即用EDTA抗凝。离心弃去血浆后再加淋巴分离液，移液器收集界面上的白细胞层，离心弃上清可见白色的沉淀，加入Trizol试剂，用移液器充分抽打、混匀，直到形成清亮不粘稠的液体。 　　1.2.2 细胞总RNA的抽提与鉴定 　　Trizol法抽提细胞总RNA，样品经紫外分光光度计检测A230、A260、A280值，甲醛变性胶电泳检测28S、18S条带变化，鉴定样品质量是否符合表达谱芯片的实验要求。 　　1.2.3 对样品RNA进行荧光标记 　　双链cDNA的合成与纯化，以cDNA为模板用随机引物和Klenow酶进行DNA链的标记，并在DNA链延伸过程中掺入荧光素。 　　1.2.4 杂交与清洗 　　将标记的DNA溶于杂交液中42℃杂交过夜，清洗后玻片甩干即可用于扫描。 　　1.2.5 信号