杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中的应用 林文耀，张 杰，程晓亮，叶 昱，陈筱薇，廖 明+，樊惠英+ (华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州510642) 摘 要：禽流感预防主要采用全病毒灭活疫苗，该疫苗存在着免疫剂量大，并且依赖于鸡胚生产，灭活不全， 干扰流行病学的血清学监测等缺点。因而迫切需要研制一种高效、新型的疫苗来预防禽流感。近年来以杆状病毒 表达系统为载体的疫苗成为研究热点，杆状病毒可以刺激机体的天然免疫系统，而其介导的外源基因在体内表达 后又可刺激机体产生特异性免疫反应，这些为开发杆状病毒作为疫苗的载体提供了理论基础。本研究旨在应用杆 状病毒表达系统为栽体，构建了H9N2亚型禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：一方面可以在 杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，另一方面杆状病毒基因组中所携带的HA基因也通过转导的作用，使其在 新型候选疫苗。 关键词：禽流感病毒；H9N2；疫苗；HA蛋白；杆状病毒双表达系统；免疫反应 自1994年陈伯伦等【1】国内首次分离到H9N2亚 又可刺激机体产生特异性免疫反应，这些为开发杆 Influenza 型禽流感病毒(Avian Virus，Arv)以来，全状病毒作为疫苗的载体提供了理论基础【Ⅷ。目前， 国各地先后有从发病禽分离到H9N2亚型AIV的报杆状病毒表达载体的应用主要有两种表达形式【91。 导【∞】，H9N2目前已经成为严重危害我国养禽业的一种携带有哺乳动物启动子，能转导哺乳动物细胞 重要传染病之一。AIV基因组含有8个片段的单股的杆状病毒，通常称作BacMan病毒。另一种是表 RNA，分别编码10个蛋白即PB2、PBl、PA、HA、面展示重组蛋白的杆状病毒。杆状病毒的囊膜糖蛋 NP、NA、M1、M2、NSl和NS2蛋白。其中，血凝N端为信号肽序列，近C端为跨膜结构域， 白gp64 素(Hemagglutinin，HA)是流感病毒颗粒表面的一种外源蛋白在信号肽的C端与gp64的N端之间发生 糖蛋白，具有凝集红细胞的能力，它可以识别靶细 融合。融合蛋白经过真核细胞内质网加工后，信号 胞受体并与之结合，在病毒吸附和膜融合过程中起 肽被切除，形成的N端融合蛋白可稳定地展示于杆 着重要作用，HA能诱导保护性中和抗体的产生， 状病毒的表面。据此，本研究通过修饰外源基因， 并能不同程度地抵抗流感病毒的攻击，是流感疫苗 双基因表达盒的构建等方法进一步改造杆状病毒载 的重要组成部分㈣。 体，将其构建为一种新型的杆状病毒双表达载体， 随着生物技术的发展，杆状病毒表达系统已经 构建表面展示H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重 成为一种操作简便、安全有效和应用广泛的真核表 组杆状病毒疫苗，为禽流感候选疫苗的研究提供新 达系统【刚。近年来研究发现杆状病毒可以刺激机体 的思路。 的天然免疫系统，而其介导的外源基因在体内表达 基金(5500一k08240)，973计划项目(2011CB504701) 作者简介：林文耀(1983．)，男，硕士研究生。Email：Headmaster85@163．tom． 一123— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 1材料和方法 胞转染前ld，将形态良好、生长旺盛的BHK．21 细胞以1×105个／孔的量接种到6孔板中，于37。C 1，1 材料 培养，待细胞长至单层，去除培养基，用含钙、镁 离