植物性饲料中植酸磷水解度测定方法的研究.docVIP

植物性饲料中植酸磷水解度测定方法的研究 摘 要:研究了测定植酸酶降解植物性饲料中植酸磷程度的方法。该方法通过钒钼酸铵比色法测定植物性饲料水解液中磷的含量,进而求出其中植酸磷的水解度,并和重量法进行相关性比较,结果表明该方法是一种简便、快捷、准确度和精密度高的方法。 关键词:植物性饲料;植酸酶;水解度;植酸磷;钒-钼酸铵比色法;重量法 A Study on Determ iningM ethod for Hydrolysis Degree ofPhosphor Phytate in Vegetable Feeds ABSTRACT:A method for determining the degradation of phosphor phytate degree in vegetable feeds by phytase was studied. The phosphor content in digestofvegetable feedswas determined by vanadium ammonium molybdate colorimetry, then the hydrolysis degree of phosphor phytatewas determined and the relativitywith gravimetricmethodwas compared. The resultshowed that thiswas a simple, rapid, high-accurate and exactmethod. KEYWORDS:vegetable feed; phytase; degree ofhydrolysis; phosphorphytate; vanadium-ammonium molybdate colorimetry; grav-i metricmethod 植物性饲料中磷的40% ~80%以植酸磷形式存在[1]。 这样不仅降低单胃动物对磷的有效吸收,还影响动物对饲料 中蛋白质和钙、锰、铁等无机微量元素的吸收利用[2]。据报 道,植酸酶添加到植物性饲料中能把植酸最终降解为肌醇和 磷酸,增加动物对饲料中磷的吸收,从而降低磷排量,减少对 环境的污染[3]。另外植酸酶还能把螯合在植酸上的营养物 质给释放出来,提高饲料能量、蛋白质和矿物质的利用率和 动物生产性能[4]。 为了更好地研究植酸酶对植物性饲料中植酸磷的降解, 本实验确定一种测定植物性饲料中植酸磷水解度的实验方 法。该方法操作简便,准确度、灵敏度、精密度高。 1 材料和试剂 1.1 主要仪器 UV-2102PC型紫外可见分光光度计:上海尤尼柯仪器 有限公司;台式离心机:上海安亭科学仪器厂;精密酸度计: 上海虹益仪器仪表有限公司; 78HW -1恒温磁力搅拌器,金 坛市华峰仪器有限公司;电热恒温水浴锅,天津市泰斯特仪 器有限公司。 1.2 试剂 浓硝酸; 1+1 硝酸溶液: 1体积浓硝酸与1体积蒸馏 水混匀; 1+2 硝酸溶液: 1体积浓硝酸与2体积蒸馏水混 匀;高氯酸; 6 mol/L盐酸; 1 mol/L盐酸; pH值5. 5的乙酸缓 冲液:准确称取34. 02 g无水乙酸钠和0. 1 g吐温20于烧杯 中,加入900 ml蒸馏水溶解,用盐酸调节溶液pH值至 5. 50?0. 01,移入1 000 ml容量瓶中,并定容至刻度 室温保 存2个月有效 ; 100 g/L钼酸铵:称取钼酸铵10. 00 g,加入浓 氨水1. 0 m,l用蒸馏水溶解,移入100 ml容量瓶中并定容至 刻度; 2. 35 g/L钒酸铵:准确称取0. 235 0 g偏钒酸铵,加入 2. 0 ml 1+2 硝酸并用玻璃棒搅拌使之成细糊状,加蒸馏水 溶解,移入100 ml棕色容量瓶中并定容至刻度 避光保存 1周有效 ;显色剂: 2份 1+2 硝酸溶液, 1份钼酸铵溶液, 1份钒酸铵溶液混合即得; 50 mmol/L基准磷酸二氢钾:准确 称取0. 680 4 g在105e烘至恒重的基准磷酸二氢钾,用pH 值5. 5的乙酸缓冲溶液溶解,并定容至100 m;l喹钼柠酮试 剂:称取钼酸钠70 g,加蒸馏水150 ml溶解,为溶液?,称取 柠檬酸60 g,加水150 ml和浓硝酸85 ml溶解,在搅拌下将 溶液?倒入其中,为溶液ò,量取蒸馏水100 m,l加浓硝酸 35 ml和喹啉5 m,l将该混合液缓缓倒入溶液ò中,放置24 h, 过滤于1 000 ml的容量瓶中,加丙酮280 m,l用蒸馏水定容至 刻度,混匀后贮存于塑料瓶中 有效期半年 。 1.3 原料 植物性饲料 米糠粕 :市场上购得;植酸酶:夏盛实业集 团有限公司, 5 000 U/g。 2 分析方法 2.1 测定原理