植物愈伤组织诱导培养基的配制.doc

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 姓名： 马宁 专业年级： 生命基地班2009级 学号： 0座机电话号码020 课程： 植物生理学实验 题目： 植物愈伤组织诱导培养基的配制 一 .实验目的 1、掌握植物组织培养基母液配制的原则。 2、掌握植物MS培养基的配制方法。 3、学会使用高压灭菌锅。学会植物组织含水量、自由水和束缚水含量的测定 二 .实验原理 概念： 植物组织培养： 将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。 愈伤组织及脱分化、再分化： 植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。 培养基配置见下表 化合物 含量 mg/L 母 液 吸取母 液量 ml/L 编号 浓度 mg/ml 称量 mg 配制量 ml NH4NO3 1650 1 33 16500 500 25 KNO3 1900 38 19000 KH2PO4 170 3.4 1700 MgSO4.7H2O 370 7.4 3700 CaCl2.2H2O 440 2 8.8 4400 500 25 ZnSO4.7H2O 8.6 3 0.86 430 500 5 MnSO4.4H2O 22.3 2.23 1115 H3BO3 6.2 0.62 310 NaMoO4.2H2O 0.25 4 0.25 125 500 0.5 CuSO4.5H2O 0.025 0.025 12.5 CoCl2.6H2O 0.025 0.025 12.5 KI 0.83 5 0.083 41.5 500 5 Na-EDTA 37.3 6 7.46 3730 500 2.5 FeSO4.7H2O 27.8 5.56 2780 盐酸硫胺素 0.1 7 1 25 25 0.05 盐酸吡多醇 0.5 8 1 25 25 0.25 肌醇 100 9 20 1000 50 2.5 甘氨酸 2 10 1 50 50 1 烟酸 0.5 11 1 25 25 0.25 三 .主要仪器试剂 三蒸水、蔗糖、琼脂、用分析纯试剂：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4?7H2O、CaCl2?2H2O、 ZnSO4?7H2O、MnSO4?4H2O、H3BO3预先配制好的不同组分的培养基母液、2-4D溶液、烧杯、移液管、铁缸子、玻璃棒、手套、加热器等。 四.实验操作步骤 1、母液的配制（教师配好） 1）配制母液的好处和原则 （1）好处 a.可减少每次配制称量药品的麻烦. b.减少极微量药品在每次称量时造成的误差。 母液配成10~100倍，2－4℃冰箱中保存，用时按比例稀释。 （2）原则：按照药品的种类和性质（相似）分别配制，避免形成沉淀。 2）实验中用到的各母液 （1）大量元素混合母液：指浓度大于0.5 mmol／L的元素，即含N、P、K、Ca、Mg、S等六种盐类的混合溶液，可配成10倍母液。 【注意事项】 a.各化合物必须充分溶解后才能混合。 b.混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与硫酸根离子，磷酸根离子错开，以免产生硫酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉淀。 c .混合时要慢，边搅拌边混合。 （2）微量元素混合母液：指浓度小于0.5 mmol／L的元素，即含除Fe以外的B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等盐类的混合溶液。一般配成100倍甚至1000倍。 （3）铁盐母液 （4）钙盐母液：必须单独配制，若同其他无机元素混合配成母液，易造成沉淀。 （5）有机营养母液：主要是维生素和氨基酸类物质。必须分别配成单独的母液。0.1、1.0、10 mg/ml。 （6）植物激素：单独配制成母液。0.1、0.5、1.0mg /ml。 a. IAA、IBA、GA3先溶于少量95%酒精，再加水定容。 b. NAA可溶于热水或少量95％的酒精中，再加水定容。 c. 2,4－D不溶于水，可用1mol NaOH溶解后，再加水定容。 d. KT和6-BA先溶于少量1mol的HCl中，再加水定容。 e. 玉米素先溶于少量95％酒精中或NaOH，再加水定容。 MS培养基的配置 向洗净的大搪瓷缸加三蒸水至大约400ml； 将储存母液按顺序摆放好； 按照配方并根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液； 加入2，4-D 2mg/L ； 称取加