特异腐质霉H313纤维二糖水解酶基因克隆和表达.pdf

!r：，：i：毛： 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 OOOOOQOOOOOOOO…5 英文摘要……………………………………………………O OOOO 英文缩写……………………………………………………………O O…9 研究论文特异腐质霉H31．3纤维二糖水解酶基因克隆与表达 前言日lJ舌 ………······…………······………………………………······10”一””””“一一…””””一”“一”“”““”””“”””…“…”一”lO OOOOOOOODOO……………OOOOOO………………OOOOO 材料与方法……O O…11 ……···……OOOOIOOOOOOOOOOOOOO OOOOOO OOO 0 O 结果 O O………O0 OOOO O…···…···27 …OOOOOD···························OOOOO 附图 O·········………···············30 OOOOO·····………·OIOOO 讨论·········O O········…………···················39 OOOOOOOOOOOOOOOODOOO·············································40 结论…······O OOOOO……………OOOOOO………DOIO 参考文献………O OO．．．……………41 综述 纤维素酶及毕赤酵母菌表达技术…………………………43 致谢········……·………·······…···……··············”···……····OOOOOmO00···55 个人简历……………………………………………………………………56 中文摘要 特异腐质霉h31-3纤维二糖水解酶基因克隆与表达 摘 要 目的：纤维素是地球上数量最多的可再生资源。它具有稳定的化学结 构，不易被降解。随着粮食短缺，能源危机和环境污染的日益严重，如何 合理的利用现存的大量的纤维素供能，成为人们关注的问题。 纤维素酶是一种催化纤维素分解的酶。用纤维素酶分解纤维素具有高 效、方便、副产品少等优势，成为研究的热点。研究发现很多生物都产生 纤维素酶，如细菌、放线菌、真菌、昆虫等。其中真菌因产生的纤维素酶 种类多，活力高而受到人们的关注。维素酶分为三种类型：内切葡萄糖苷 酶(EG)，纤维二糖水解酶(CBH)，卜葡萄糖苷酶(BG)。 国内纤维素酶的产量较低，大部分需要进口。人们利用多种方法来提 高纤维素酶的产量和活力。传统的菌种选育和几种酶的混合搭配，对酶的 催化作用提高不大。将基因工程的方法应用于酶学领域，对纤维素酶的研 究向前推进一步。例如：人们用活性位点突变的方法，改变酶蛋白的折叠， 来提高酶的活性。人们也将纤维素酶的基因转入到工程菌中进行表达，以 提高它的产量。目前使用的工程菌有很多，如大肠杆菌、酿酒酵母菌、毕 赤酵母菌等等。其中，毕赤酵母菌表达真核蛋白具有产量高、易培养、对 蛋白的修饰与真核生物相似等独特的优点而被广泛的应用。 中科院微生物所在1970年从腐殖土里分离得到了一株特异腐质霉 H31．3