UpregulatedlongnoncodingRNAAFAPASexpression概述.ppt

* Background: 在东南亚，相比其它癌症，NPC是一种特殊的疾病，有着显著不同的致病因素，发病机理，临床行为和治疗方式。像大多数的癌症那样，NPC的发展是一个多步骤的过程，包括致瘤基因的激活和肿瘤抑制者的沉默。然而，有关NPC发生和发展进程中精确的分子机制依然是不明确的。因此，对NPC的进一步研究是非常必要的。 肌动蛋白丝相关蛋白1-反义RNA1，即AFAP1-AS1是长链非编码RNA，在NPC中显著过表达。长链非编码RNA调节基因转录和转录后调节，异常表达的长链非编码RNA在人类癌症中扮演重要的角色。长链非编码RNA的长度大于200个核苷酸，通过调节基因的表达参与多个生理过程。截止到目前为止，超过50000个IncRNAs在人类基因组中被报道，然而，有关这些IncRNAs中的大多数功能是未知的。 本文更进一步研究了IncRNAs在NPC中的重要性。提出了有关 AFAP1-AS1在NPC发生发展过程中扮演角色的一个猜想。未来的研究可以基于这些发现进行NPC的生物标记研究和靶向治疗。 A图利用两个数据库分析非肿瘤组织和NPC差异表达基因，筛选出共有的异常表达的IncRNAs。得出表达上调的IncRNAs有11个，表达下调的有13个。 图一 B图和C图显示在两个分层聚类中，部分基因在非肿瘤组织中表达下调，在NPC中表达上调。另一部分基因在非肿瘤组织中表达上调，在肿瘤组织中表达下调。AFAP1-AS1即为所研究的基因。 图二 A图显示正如在微阵列中分析的那样，相比非肿瘤NPC组织，AFAP1-AS1在NPC活检组织中的表达是上调的。 B图：再一次证实相比非肿瘤NPC组织，AFAP1-AS1在NPC活检组织中的表达是上调的。 C图：利用实时定量PCR技术，在另一个独立NPC样本中也验证了相比非肿瘤NPE组织，AFAP1-AS1在NPC活检组织中的表达是上调的。 D图：AFAP1-AS1的表达与淋巴瘤转移是有关的。NPC-N0是指没有淋巴结转移的NPC组织，NPC-N1/2是指有淋巴结转移的NPC组织。 E图：AFAP1-AS1的表达与临床疾病的阶段是相关的。 F图：原位杂交结果显示，相比非肿瘤NPE样本，AFAP1-AS1在NPC样本中的表达上调。NPE是非肿瘤组织，NPC-Negative 是癌旁组织，NPC-Low是低分化的癌组织，NPC-High 是高分化的癌组织。 图G表示随着淋巴结的转移，AFAP1-AS1的在NPC患者体内表达情况及所占的比例。表明AFAP1-AS1的表达与晚期肿瘤阶段无明显的关系。 图H表明在原位癌和远处转移癌中，AFAP1-AS1的在NPC患者体内表达情况及所占的比例。从原位癌到远处转移癌，AFAP1-AS1的表达升高。 图I和J显示癌旁组织，低分化的癌组织，高分化的癌组织的患者的总生存率和无复发生存率的分析结果，即AFAP1-AS1的表达与不良预后的关系。总生存率和无复发生存率均表明AFAP1-AS1的表达越高，患者存活率越低。 图三 A图：利用siRNA沉默AFAP1-AS1基因，干扰AFAP1-AS1的表达。在鼻咽癌上皮细胞系5-8F，HK1和HNE2中，相比空白组Mock和对照组NC，AFAP1-AS1在siRNA1,siRNA2和siRNA1+2的干扰下表达降低。 B图：划痕实验说明AFAP1-AS1基因敲除后会抑制5-8F，HK1和HNE2的细胞迁移。 图C：利用transwell实验证明AFAP1-AS1基因敲除抑制肿瘤细胞5-8F，HK1和HNE2的侵袭。 图四 A图：细胞生存能力MTT实验。向细胞中转染AFAP1-AS1 siRNA或control siRNA，观察到AFAP1-AS1基因沉默对肿瘤细胞的生长发育能力没有明显作用。 B图：利用流式细胞术FCM进行细胞周期分布及细胞凋亡检测实验。从5-8F，HK1和HNE2图中结果来看，AFAP1-AS1的基因沉默对肿瘤细胞的细胞周期分布和细胞凋亡没有明显作用。 图五 A和B图：向小鼠尾部静脉注射AFAP1-AS1基因沉默的细胞和作阴性对照的细胞，观察小鼠肺部转移灶的数量，结果表明AFAP1-AS1基因的沉默大幅度降低了肿瘤转移灶的大小和数量。 C图表示可见的肿瘤转移结节的数量。注射5-8F control-siRNA 细胞的老鼠肺表面肿瘤结节平均数量为每只老鼠14.4±4.5个，注射5-8F AFAP1-AS1-siRNA 细胞的老鼠肺表面肿瘤结节平均数量下降到每只老鼠 6.0± 2.1个。说明AFAP1-AS1基因的沉默可以减少肿瘤结节的转移。 D图：注射AFAP1-AS1 siRNA 表达的5-8F细胞的老鼠肺转移灶的情况。结果表明