兽医微生物实验指导资料.doc

兽医微生物实验教案实验一 显微镜油浸系的使用及细菌基本形态构造的观察 【】 1.2.正确 【油浸系的原理】 油1滴香柏油，调整光源检查细菌标本的方法。油浸镜是一种高倍放大的物镜，一般都刻有放大倍数，如95×、100×等。其镜头标记国产镜多用“油”字表示，国外产品则用“Oil”(Oil Immersion)或HI(homogenmus Immersion)表示。而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长，镜片最小，这也是识别的另一种标志。其使用原理是由于香柏油与玻璃的折光率相似(香柏油为1.515，玻璃为1.52)。镜检时，滴加香柏油的作用是使光源尽可能多的进入物镜中，避免光线通过折光率低的空气(折光率为1.O)而散失，因而能提高物镜的分辨率， 使物像明亮清晰。 【器材及试剂】 1.菌种：大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、细菌的三型等标本片 ； 2. 3.材料：香柏油，二甲苯，擦镜纸等。 【】 ()细菌基本形态构造的观察 1.准备 安置显微镜à调节光源à调节双筒目镜间距à调节聚光器数值孔径值。 将光圈完全开放，升高聚光镜与载物台同高，置标本片于载物台上，在低倍镜下对光，用于转动反光镜以调节之，至视野最亮时为止。若用天然光源宜用反光镜平面，较弱光源用凹面。检查未染色标本，光不宜太强，染色标本需强光。光线强弱可通过放大或缩小光圈、升降聚光镜、旋转反光镜调节之。 2.观察 将香柏油一滴滴于标本片有颜色的观察区，并置于载物台上，用片夹固定好，用推进器将观察区置于物镜正下方，依次用高倍镜à油镜观察。用油浸镜检查，使油镜头浸入油滴中，几乎与标本面接触为度。然后由接目镜注视镜内，同时慢慢转动粗调节螺旋提起镜筒(绝对不能下降镜筒)至能模糊看到物像时，再转动细螺旋(细螺旋转动一般不超过1周)，直至物像清晰为止。包括大肠杆菌、葡萄球菌的形态及炭疽芽孢、巴氏杆菌荚膜和大肠杆菌的鞭毛等细菌的特殊结构。 (二)显微镜的养护 1.上升镜筒，取下载玻片。 2.用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。 切忌用手或其他纸擦拭镜头，以免使镜头沾上污渍或产生划痕，影响观察。 3.用擦镜纸清洁其他物镜及目镜；用绸布清洁显微镜的金属部件。 4.将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八”字形，再向下旋。同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。 作业 名词解释 细菌 荚膜 芽孢 油浸系 二． 问答题 绘制葡萄球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌荚膜及芽孢等形态及排列方式； 使用油镜时应注意哪些问题？加香柏油前载片上可否有水，为什么？ 细菌有哪些基本形态，各有哪些特征？ 实验二 细菌抹片的制备及染色 【】 (1) (2)认识革兰氏染色的反应特性。 【基本原理】 1. 简单染色法 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法， 一般用于观察个体形态与细菌排列。 由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、 结晶紫对细菌进行染色。美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使 菌体着色。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 2.革兰氏染色液 G—菌:细胞壁中含有较多类脂质，肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。G+菌:细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的颜色。 【器材及试剂】 1.菌种：培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌斜面菌种 ； 2. 3.材料：载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等； 4.染料：美兰染色液、草酸铵结晶紫染色液，革兰氏碘液，95%乙醇，0.5%石炭酸复红染色液。 【操作步骤】 (一)载玻片处理 载玻片应清晰透明，清洁而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好，如有残余油渍，可按下列方法处理。 1．滴上95%酒精2-3滴，用清洁纱布擦拭，然后以钟摆速度通过酒精灯焰3-4次。 2．若上法仍未能除去油渍，可再滴上1-2滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻拖过。 玻片洁净后，用玻璃铅笔在预涂材料处的背面划一个直径1.5cm的圆圈，用以标记。 （二）涂片方法 1．菌落涂片方法 涂片时，左手握菌种管，右手持接种环（又称铂金耳）取1-2环生理盐水，置于载玻片上，然后将接种环在火焰上灭菌。待冷后，从菌种管内取少许菌落，置于生理盐水中混匀，涂成直径1.5cm的涂膜，此膜应既薄又均匀为好，待于即成。 2