梅毒实验室检测课件要点.ppt

梅毒螺旋体抗原血清学试验 试验原理 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。 实验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPA/TPHA原理 TPPA试验原理与TPHA试验基本相同 TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞 特点 梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原 操作步骤 1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。??? 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果。 结果判断 1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。 4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。? ?? 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 ??? 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+：?颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。? ?±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。  ??一：颗粒紧密沉积孔底中央。 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 原理 将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。 * 【感染5～7周（或硬下疳出现后2～3周）】 梅毒的实验室诊断 病原体 为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum) 苍白亚种 梅毒 苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒 极细亚种 雅司病 密螺旋体属 品他螺旋体 品他病 梅毒螺旋体的生物学特性 1、直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。 2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。 3、G-，但不易着色。Fantana镀银染色呈棕褐色。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温42℃以上均极易将其杀灭。 梅毒螺旋体 传播途径 性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母婴传播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿 病期越长，传染性越小; 输血传染 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接触部位附有梅毒螺旋体） 。 梅毒的分期 梅毒的诊断 梅毒的诊断 早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒） 必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析 梅毒的实验室检查 结果对诊断有决定性意义 常用梅毒实验室检测方法 病原学检测 血清学检测 病原学检查 取材方法 一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液 暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法 在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检