壳聚糖衍生物的制备及其抗新城疫病毒活性研究 本科毕业论文.doc

密级:，，，，，，，，，，，，，，，，， 硕 士 学 位 论 文 壳聚糖衍生物的制备及其抗新城疫病毒活性研究 2015年 05月 原创性声明 ? 本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。 论文作者签名： 日期： 学位论文版权使用授权书 ? 本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。 （保密论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签字：??????? 日期： ? 导师签字：??????????? 日期： The preparation of chitosan and its derivatives and their inhibition effect on Newcastle disease virus By He Xiaofei (Marine Pharmacology) Directed by Xing Ronge A Dissertation Submitted to The University of Chinese Academy of Sciences In partial fulfillment of the requirement For the degree of Master of Science Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences May, 2015 致谢 时光匆匆而逝，三年好似昨天。一年的北上求学，两年的实验探索，时至今日已接近尾声。十分感谢三年来，我的指导老师——邢荣娥老师，在生活和学习上给予的悉心指导与帮助，让我对过去充满怀念、对现在充满感恩、对以后充满信心。邢老师以其热情开朗的生活态度、严谨客观的研究认识、努力认真的工作作风深深影响着我。从生活琐事到实验注意，事事躬亲，对学生关心爱护极佳。万分荣幸，能有这样一位博学、谦逊、严谨而又善良的老师指导我青春里最重要的道路。愿老师在以后的工作生活中，万事如意，幸福安康！ 十分感谢三年来课题组李鹏程老师的关心与指导，生活中，李老师平易近人、关心学生；科研中，李老师严谨认真，锐意创新。谆谆教诲、高尚师德学生永不敢忘，谨此毕业之际，特向李老师表达学生深深的感谢之情，望您身体健康，合家欢乐！ 在三年的学习生活中，感谢刘松老师、于华华老师、李克成老师、秦玉坤老师、王雪芹老师、李荣锋老师、陈晓琳老师给予的极大帮助与指导，在此特别表示感谢。 感谢罗丰雷师姐、邹平师姐、杨皓月师姐、王晶师姐、李俨师兄、宋琳师姐、张恩惠师兄、周苗苗、岳洋、黄勇师弟、张晓倩师妹、刘卫翔师弟、金秋师妹、孙雨豪师弟、杨悦师妹等实验室兄弟姐妹们给予的支持与帮助，在此一并表示感谢。 特别感谢奥兰百特尹燕博老师课题组对抗病毒实验的支持与指导，感谢张全斌老师课题组在仪器设备上的帮助与支持，也感谢家人一直以来的关心、支持与体谅。 学生 何晓飞  摘要 新城疫是由新城疫病毒（NDV）引起禽类的一种以呼吸道、消化道黏膜出血为典型症状的高度接触性、急性败血性传染病。目前针对鸡新城疫病毒主要采用疫苗方法，以预防为主。近年来大量研究表明，海洋生物多糖具有抗病毒和提高机体免疫力的活性。壳聚糖作为天然存在的唯一带正电荷的多糖，具有调节免疫、抗肿瘤、抗菌、降脂、保湿等非常好的生理活性，且研究发现，壳聚糖及其衍生物可抑制几十种植物病毒、类病毒的侵染。但其是否具有抗新城疫病毒活性，国内外还未见报道。 因此，本文以不同分子量、不同结构类型、不同基团修饰的α-壳聚糖、β-壳聚糖和6-胺取代-6-脱氧壳聚糖衍生物为研究对象，鸡胚尿囊液中血凝效价的降低作用为指标，筛选出最佳抗鸡新城疫病毒的产品；同时，采用荧光定量PCR技术，测定免疫因子的变化，以此确定壳聚糖及其衍生物在对抗新城疫病毒的过程中，对于免疫系统的激活与调控，从而确定壳聚糖及其衍生物对于机体免疫系统的影响及药效机制。具体结果如下： 测试样品均具有抗新城疫病毒活性，分子量、分子结构、修饰基团、产品浓度和接种方式对活性影响显著。1）α-壳聚糖和β-壳聚糖抑制新城疫病毒的最佳分子量分别为4513Da和5743Da；2）β-壳聚糖的抗新城疫病毒活性明显优于α-壳聚糖，β