微生物学显微镜构造和微生物机构实验.ppt

请遵守实验室规章制度， 爱惜实验器材！实验完毕后请将器材归位放好！值日生打扫完清洁后请将门窗水电关好！ 实验一 显微镜的构造及使用 细菌简单染色与观察 西南大学微生物学实验中心 一、实验目的： a. 学习并掌握油镜的原理和使用方法 b. 掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染 色的步骤和关键点 c. 识别细菌基本形态并画图 d. 学习无菌操作技术 二、实验原理： 1. 油镜 使用香柏油增加照明亮度 增加显微镜的分辨率 2）分辨力（resolution or resolving power）指显微镜能分辨两点之间的最小距离的能力。 D可用下式表示： D=λ/2N.A. 3）放大率： 显微镜放大物体，首先经过物镜第一次放大成像，目镜在明视距离造成第二次放大像。放大率就是最后的像和原物体两者体积大小之比例。因此，显微镜的放大率（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积，即： V=V1×V2 4）焦深： 在显微镜下观察一个标本时，焦点对在某一象面时，物象最清晰，这象面为目的面。在视野内除目的面外，还能在目的面的上面和下面看见模糊的物象，这两个面之间的距离称为焦深。物镜的焦深和数值孔径及放大率成反比：即数值孔径和放大率愈大，焦深愈小。因此调节油镜比调节低倍镜要更加仔细，否则容易使物象滑过而找不到。 生物染色的染料：碱性染料、酸性染料和中性染料。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。 三、 实验材料 显微镜，擦镜纸。 石炭酸复红染液。 香柏油,无菌水,95%酒精。 载玻片, 接种环,镊子,酒精灯。 菌种：四联球菌，枯草杆菌。 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基。 四、实验步骤 油镜使用注意事项 1. 观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚酒精混合液（乙醚2份，纯酒精3份）或二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。 2. 将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将镜筒下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，用一个干净手帕将接目镜罩好，以免目镜头沾污灰尘。最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。 五、 作业 1. 根据自己的体会总结实验过程中的注意事项 2. 油镜使用注意事项 注 意 实验报告须包括以上各部分内容以及实验结果，本次实验结果为所观察到的菌体图片，请用一直径2cm以上的圆代表视野，在圆内画出所观察的结果，画图请用铅笔。 严禁抄袭他人结果！！！！！！！！！！！ * * 显微镜的性能 首先取决于物镜的性能， 其次为目镜和聚光镜的性能。 1）、数值孔径 也叫做镜口率（或开口率），简写为N.A，在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的最重要指标。 N.A=n.sin α /2 式中： n—物镜与标本之间的介质析射率 α—物镜的镜口角 所谓镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度， 2. 细菌简单染色原理 1. 涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴无菌水中; 2.干燥 在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行). 3.热固定 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 4. 染色 在固定的标本上加结晶紫染液或石炭酸复红染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗; 吸干 染色过程中注意勿使染液干涸。 5.镜检 先低倍，再高倍，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油