分子生物要点.doc

核酸琼脂糖凝胶电泳 常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。 (一) DNA碱基组成的Chargaff规则 (二) DNA的二级结构 依据：Chargaff规则；X衍射图；碱基不可滴定。 要点（1）两条链反向平行，绕同一轴相互缠绕成右手螺旋；（2）磷酸和戊糖交替处于螺旋外围，碱基处于内部，形成碱基对；(3) 双螺旋的直径为2nm，碱基堆积距离为0.34nm；（4）一条链的核苷酸序列可以决定另一条互补链的核苷酸序列。 大部分真核生物中有5种组蛋白，两栖类、鱼类和鸟类还有H5以替代或补充H1。染色质是由许多核小体组成的，H2A，H2B，H3和H4各2个分子构成的8聚体是核小体的核心部分，H1的作用是与线形 DNA结合以帮助后者形成高级结构。 RNA聚合酶(DDRP) E. coli的RNA聚合酶是由四种亚基组 成的五聚体（ ?2 ? ?? ?） ? 36512 决定哪些基因被转录 ? 150618 催化功能 ? 155613 结合DNA模板 ? 70263 辨认起始点 原核生物的 RNA聚合酶都受一类抗 结核药利福平或利福霉素的特异性抑制。 分子伴侣 分子伴侣是细胞一类保守蛋白质，可识别肽链的非天然构象，促进各功能域和整体蛋白质的正确折叠。 Attenuation (衰减作用) : a regulation at the transcription termination step a second mechanism to confirm that little tryptophan is available 真核基因的复杂性 真核基因组更大.大肠杆菌基因组有4 ×106 bp,人单倍体基因组有3×109 bp ,是其800倍;是嗜菌体基因组的10万倍. 大肠杆菌有4千个基因,人有近10万个基因 原核生物基本是单倍体,真核生物是2倍体. 真核生物DNA与组蛋白等构成染色质染色体,被包裹在核膜内;有核外遗传(mtDNA) 真原核基因结构比较 原核基因按功能成串排列,组成操纵子单位,转录产物为polycistron; 真核生物一个结构基因转录为monocistron. 原核有转录与翻译的偶连,真核表达则有严格的时区间隔 . 原核大部分基因是编码序列,而真核大部分是调控序列 原核为蛋白质编码的大部分是连续基因; 真核为蛋白质编码的是断裂基因,在转录后经剪接去除内含子,才能翻译获得完整的多肽,这就增加了表达的调控环节. 原核生物除rDNA,tDNA外,很少有重复序列;真核含大量的repetitive sequences: high _:10-300bp,占人基因组的20%,功能不明,重复103以上 moderate_:300-500bp,占基因组10-40%, 5s, tRNA,组 蛋白基因, 10~103 single copy sequences:基本不重复,占50-80%(人65%) 大多数蛋白质的编码基因. 真核基因调控特点 调控环节更多 同原核一样,调控主要发生在转录水平;但无转录翻译偶连,且转录翻译后有复杂的信息加工过程 转录与染色质的结构变化有关 1. 间期核染色质: 异染色质hetrochromatin高度压缩,不转录; 常染色质euchromatin,较松散;其中10%为active chromatin.超螺旋松弛. 活性←→非活性 2.组蛋白能非特异性的阻遏转录. 组蛋白为碱性,易与带负电的磷酸基结合,从而遮蔽了DNA分子 3.非组蛋白具细胞组织特异性,能特异的去除组蛋白的阻遏作用,有利转录. 4.DNA甲基化能阻碍转录因子与DNA特定位点的结合, 影响转录 以正性调控为主 真核启动子对RNA聚合酶亲和力低,需要多种激活蛋白的协同作用.转录调控蛋白有激活,阻遏或二者兼有,但以激活为主 适应环境的瞬时调空是可逆的,而发育控制调控是不可逆的,决定细胞生长,分化,发育的全过程 真核基因表达调控的环节 DNA水平:基因数量,结构 转录水平:顺式作用元件与反式作用因子 转录后水平:mRNA的加工成熟 翻译水平:起始复合物及mRNA稳定性 翻译后水平:蛋白质加工修饰 DNA水平的调控 基因的丢失 如：马蛔虫胚胎发育过程中有27% DNA的丢失