化学生物学化学物质与核酸的相互作用（参考）.ppt

二、荧光法 （1）3,5-二氨基苯甲酸 （2）溴乙啶（Ethidum bromide, EB） （3）DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚） （4）meso-四（对-三甲基氨基）卟啉（TAPP） （5） 耐尔蓝（Nile blue, NB）又名尼罗蓝 （6）吖啶橙（Acridine orange, AO） 三、共振瑞利散射法 对核酸等生物大分子的测定和表征是一种非常有用的技术 ，可用于核酸的定量测定。 （1）TAPP及质子化TAPP 在432nm附近产生特征吸收峰。用于测定ctDNA，其线性范围为（1.8~10.8）×10-7mol/L，检出限为4.1×10-8mol/L。 （2）亚甲蓝（Methylene blue, MB） 用于痕量核酸的定量测定，其线性范围为0~14μg/ml（ctDNA）和0~0.24μg/ml（yRNA），检出限为11.0ng/ml（ctDNA）和8.6ng/ml(yRNA)。 （3）中性红（Neutral red, NR） 在pH为2.3的NR溶液中，加入核酸后能导致溶液的RRS强度急剧增强，最大RRS峰位于330nm处，用于测定ctDNA，其线性范围为0.048~5.25μg/ml，检出限为48.2ng/ml。 （4）耐尔蓝（Nile blue, NB） 在弱碱性（pH7.20~7.80）的Tris缓冲介质中，耐尔蓝硫酸盐（NBS）能在核酸表面进行长距组装，并于293.8nm处产生特征的共振光散射峰。据此可用于0~1.00μg/ml ctDNA的测定。方法具有很高的灵敏度，检出限可达0.7ng/ml。 其他：罗丹明B、噻二嗪、香豆素、荧光素等 Thanks ①碱基置换 碱基置换是指一对碱基发生改变，被另一对碱基所置换。 分为两类： 转换：一个嘌呤被另一嘌呤（G A） 或一个嘧啶被另一嘧啶(C T)所置换。 颠换：一个嘌呤被一个嘧啶（A C 或 G T） 或一个嘧啶被一个嘌呤（C G或T A）所置换。 诱变剂可同时引起转换或颠换，也可能是其中的一种。 化学诱变剂有的可以直接引起碱基置换，有的则是间接引起置换。 直接引起碱基置换的诱变剂 是一类可以直接和核酸的碱基发生化学反应的诱变剂。 种类：亚硝酸、羟胺和各种烷化剂（硫酸二乙酯、环氧乙酸、亚硝基胍、氮芥等。 ） 亚硝酸可使碱基发生氧化脱氨作用，它能使腺嘌呤（A）变成次黄嘌呤（H），以及使胞嘧啶（C）变成尿嘧啶（U），从而发生转换。也可使鸟嘌呤（G）变成黄嘌呤（X），但这时不引起转换。以下仅举其中的A→H而引起的转换反应。 这类诱变剂都是一些碱基类似物，如5-溴尿嘧啶（5-BU）、5-氨基尿嘧啶（5-AU）、8-氮鸟嘌呤（8-NG）、2-氨基嘌呤（2-AP）和6-氯嘌呤（6-CP）等。 间接引起碱基置换的诱变剂： 主要是一些碱基类似物 ,如：5-溴尿嘧啶(5-BU)和5-氨基尿嘧啶（5—AU）、叠氮胸腺嘧啶（AIT）等等； 作用方式：通过活细胞的代谢活动参入到DNA分子中，主要是在DNA复制时碱基类似物插入DNA中，引起碱基对配对错误，造成碱基置换。 以5-溴尿嘧啶(5-BU)为例， 5-BU是胸腺嘧啶（T）的 的类似物 ，酮式的5-BU可以和A配对，烯醇式的5-BU 可以和G配对，在DNA分子复制的过程中，由于5-BU的插入和互变异构导致碱基置换。 移码突变是指由于DNA分子中一个或少数几个核苷酸的加入或丢失，从而使该部位后面的遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。 引起移码突变的诱变剂：主要是吖啶类染料，如吖啶黄、吖啶橙等等。 这类化合物都是平面型的三环分子，它们的结构与一个嘌呤—嘧啶对十分相似。 移码突变 移码突变是指由于DNA分子中一个或少数几个核苷酸的加入或丢失，从而使该部位后面的遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。 引起移码突变的诱变剂：主要是吖啶类染料，如吖啶黄、吖啶橙等等。 这类化合物都是平面型的三环分子，它们的结构与一个嘌呤—嘧啶对十分相似。 由此可见，在DNA链上增添或缺失一、二或四、五个碱基时，均可引起移码突变，而增添或缺失三个或六个时，则不影响读码，只引起短的缺失或增添（插入）。 ⑴物理因素：主要是各种射线。如：紫外线、Ｘ射线、α射线、γ射线等。 ⑵化学因素：主要是各种能与DNA发生化学反应的化学物质。如烟碱、秋水仙素、黄曲霉毒素、硫酸二乙酯等。　 ⑶生物因素：主要是某些寄生在细胞内的病毒。 三、基因突变的原因 1.人工诱变的方法：　　用射线（如紫外线、X射线、激光等）照射或致突变物质处理生物的敏感部位（植物的萌发种子、动物的生殖腺等）。 　　例⑴：我国科技人员用60CO产生的射线照射水稻萌发的种子，培育出优质高产、抗病虫害强的新品种。