化验员微生物理论检验员基础资料（参考）.ppt

二、培养基的配制 1、培养基的分类 根据原料来源不同，可将培养基分为合成培养基、半合成培养基与天然培养基。 根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基 根据培养基的用途，可分为选择培养基、鉴别培养基、加富培养基、基本培养基等。 2、已灭菌培养基的保存方法 防尘——在卫生条件差的地方贮存，依附在尘埃中的细菌、真菌等会落在培养瓶表面，使用前若不进行表面灭菌处理，在接种时就容易随着气流进入容器，使其受到污染 避光——吲哚乙酸等某些物质易见光分解。在光照下，一些培养基添加物的成分也会发生变化。 恒温——培养基冷却后，可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏。在培养基摆放过程中温度不应过高，同时还应避免温度有较大幅度的变化 定期更新——培养基不宜长期贮存 3、培养基的实验室制备方法和使用方法 制备和使用——GB/T 4789.28 2003 制备培养基 1. 计算 2．称量 3．溶化 4．灭菌 5．倒平板 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 4、培养基的质量控制方法 5、培养基的质量测试 1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发／脱水。 2 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验)，确定无微生物生长方可使用。 3 性能测试 3.1 测试菌株选择测试菌株是具有其代表种的稳定 特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株，应来自国际／国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株，菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。 3.2 定量测试方法改良Miles-Misra法测试菌株过夜培养物10倍递增稀释；测试平板和参照平板划分为4个区域并标记；从最高稀释度开始，分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域；将稀释液涂满整个1/4区域，37℃培养18小时；对易计数的区域计数，按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数／参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。 3.3 半定量测试方法 改进的划线法接种法平板分ABCD四区，共划16条线，平行线大概相隔0.5cm，每条有菌落生长的划线记作1分，每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分，没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分，分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长，而非目标菌的生长应部分或完全被抑制，目标菌的生长指数G大于6时，培养基可接受。 3.4 定性测试方法平板接种观察法用接种环取测试菌培养物，在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养，目标菌应呈现良好生长，并有典型的菌落外观、大小和形态，非目标菌应是微弱生长或无生长。 三、无菌操作 使用超净工作台的注意事项 （1）使用前30分钟开启紫外灭菌灯，对工作区域进行照射杀菌 （2）使用前20分钟将通风机开启 （3）使用时关闭紫外灭菌灯，开启日光灯 （4）使用完毕，应擦净工作台面，开启紫外灭菌灯消毒灭菌，20分钟后关闭紫外灯，关闭超净台电源 （5）操作区不允许放置不必要的物品，保持洁净、气流畅通 （6）挡风玻璃上下移动时不要用力过猛，以防玻璃破损伤人 （7）长期不使用的工作台要拔下电源插头 （8）请勿在周围有人时开启紫外灯 无菌操作人员的工作要求 1、进入检验室必须穿好工作服，戴上工作帽，必要时可戴口罩及手套。工作完毕后离开检验室，脱去工作服，要放在指定地点，工作服要经常洗涤和消毒。 2、检验室要经常保持清洁、整齐，禁止饮食、吸烟及用嘴湿润铅笔或标签等物。 3、在检验室进行工作时，严禁喧哗、打闹，保持肃静，不得到处走动，以免影响他人工作。 4、在检验中应确保无菌操作，以达到结果正确。未经许可不准将细菌及病料携带出室外，一定要妥善保管和处理好细菌和病料。 5、各项仪器要精心爱护，贵重仪器要专人负责，定期检查与保养，使用时按照规定方法使用。 6、检验室内各种培养基、试剂、染液等，必须贴上标签，写明名称、规格、配置时间等。不需要的培养物，应立即进行高压蒸汽灭菌处理。 7、经常注意节约水、电、染色液及药品等，在离开检验室时，必须做好防护检查工作，特别是水、电、煤气的检查。 8、工作完毕，检验台应及时清理，桌面用消毒液擦拭干净；用过的培养物、病料、动物及器具均须放在指定地点，不得随意乱放或用水冲洗，待灭菌后处理。 9、离开检验室时，将用过的物品整理