菊花的组织培养(赵文英)案例分析.ppt

（三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种. ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件. ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分. 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 （四）培养 1、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养. 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养. 2、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色. * 菊花的组织培养 一、基础知识 1、植物的组织培养 （1）概念 植物的组织培养又叫离体培养，指植物的组织、器官、细胞和原生质体等（外植体）在离体条件下，通过无菌操作，在人工控制条件下（一定的营养物质、激素、温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的完整植株的技术。 一、基础知识 1、植物的组织培养 （2）必要条件 细胞离体 一定的营养物质、激素和其他外界条件 无菌条件 一、基础知识 1、植物的组织培养 （3）原理：____________________ 植物细胞的全能性 ?概念： ?原因： ?全能性大小： 细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。 生物体的每一个细胞都具有该物种生长、发育、遗传变异的全套遗传物质 受精卵生殖细胞体细胞 植物细胞动物细胞 分裂能力强分裂能力弱 一、基础知识 1、植物的组织培养 （4）相关概念 A.外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官. B.脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。 C.再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程 D.愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞. 一、基础知识 1、植物的组织培养 （5）基本过程 ①B是 组织，其特点是：细胞排列 ， 是一种高度 化的呈 状态的 细胞。 ②A过程是 ，是指由高度分化的植物组织或细 胞产生 的过程，又叫去分化。 ③C过程是 ，是指 重新分化成根或芽等器官的过程。 愈伤 疏松而无规则 液泡 无定形 薄壁 脱分化 愈伤组织 再分化 愈伤组织 人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织 1.内因 ①植物的种类、材料的 _和 等都会影响实验结果。一般来说，容易进行 繁殖的植物容易进行组织培养。 ②菊花的组织培养，一般选择 植株的茎上部新萌生的 作材料。选取生长旺盛嫩枝进行组织培养的原因是 。 年龄 保存时间的长短 无性 未开花 侧枝 嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化 二、影响植物组织培养的因素 MS固体培养基成分及比例 2.外因 (1)营养 物质 矿质元素(含大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S; 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 二、影响植物组织培养的因素 微量元素:B、Mn、Cu、