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中华危重病急救医学 2013 年 9 月第 25 卷第 9 期 ChinCritCareMed ，September2013 ，Vol.25 ，No.9 ·573 · ·综述· 微生物非培养技术的进步及肠道微生态的研究进展 孙丽莹 杨云生 人类肠道微生物群落被认为是人类的“第二指纹”及“第 术主要有 16SrDNA 指纹图谱技术及基于测序基础上的克隆 ［ ］ 二基因组” 1 ， 微生物的基因组数量是人类基因组的 150 多 文库技术和近年发展的新一代高通量测序技术。 16SrDNA 指 倍，这些微生物构成人体的一个独立器官，参与机体的代谢， 纹 图谱技术主要有变性梯度凝胶电泳（DGGE ）和随后发展的 ［ ］ ［ ］ 并与各器官之间相互关联，对人类健康具有深远影响 2-3 。 如 温度梯度凝胶电泳（TGGE ）。Muyzer等 7 1993年首次将 DGGE ［ ］ 何定义复杂的微生物生态系统，通过研究技术的不断进步来 技术用于微生物群落结构的研究。 2001 年，Zoetendal 等 8 运 探索它们的作用是 21 世纪微生物学中重要的研究计划。 用 DGGE 技术分析了宿主基因型、生理和环境因素对肠道微 长期以来，研究肠道菌落一直是依靠细菌培养，然而，在 生物组成和功能的影响，发现成人肠道微生物群落结构相对 人类肠道中，绝大部分种类的细菌不能用现有的培养方法获 比较稳定，且具有亲缘关系，表明宿主基因型及其相关因素 ［ ］ 得 4-5 。随着非培养技术、宏基因组测序技术的进步，微生态的 是影响肠道微生物的重要因素。 但 DGGE/TGGE 技术的敏感 研究进入了一个全新的阶段。 度有一定 限制 ，只能检测到 1%的微生物菌落，且在进行 PCR 1 微生物非培养技术的进展 扩增时可能会忽略数量少但功能重要的细菌。 ［ ］ 1985 年，Lane等 6 通过直接分析样本中细菌的 5SrRNA 与指纹图谱技术相比， 16SrRNA 全长基因克隆文库技术 和 16SrRNA 的基因序列， 描述了环境样本中的微生物多样 分析序列片段长、信息量较大。 美国 AppliedBiosystems（ABi ） 性，从而开启了非培养技术的里程碑。 在生物进化的漫长过 公司 1987 年推出第一 台测序仪 ABi370 ， 开始使用 Sanger 测 程中，rRNA 即核糖体 RNA 分子保持相对恒定的生物学功能 序法，用引物经 PCR 克隆出全长的 16SrRNA 基因，这种方法 和保守的碱基排列顺序，同时也存在着与进化过程相一致的