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第二十二章 色层分离法;色层技术（层析技术）;色层分离方法 －Chromatography;层析法的发展过程;1941年 Martin和Synge发展了分配色谱。 1944年 Martin等发展了纸色谱。 1952年 Martin和James发展了气-液分配色谱。 1956年 Van Deemter等发表关于色谱效率的速率理论，并应用到气相色谱中。 1957年 制作离子交换色谱氨基酸分析仪。 1959年 在Cordon Conference上提出了第一篇凝胶过滤色谱的报告。 1963年 Giddings的理论工作为现代液相色谱奠定了理论基础。;60年代中期 凝胶渗透色谱出现。 60年代后期 亲和色谱出现。 1969年 现代液相色谱开始受到重视。 有两次诺贝尔化学奖是授予色谱学领域的研究工作：1948年瑞典科学家Tiselins由于他的关于电泳和吸附分析的研究获奖，1952年英国的Martin和Synge因为发展了分配色谱而获奖。 ;层析的原理; 层析分离法;层析分离分类（1）;⑴分析色谱（10mg） ⑵半制备色谱(10-50mg) ⑶制备色谱(0.1-1g) ⑷工业生产规模色谱(>20g/d) 年产10g合格的重组人粒细胞集落刺激因子（rhGcs-F），其产值高达1亿元。;层析分离分类（3）;基本概念;色层分离法基本原理;色层分离法基本原理;分子筛层析示意图;分配系数;解离常数和分离 因数;; ;洗脱容积Ve;;理论塔板fr—第r块塔板上溶质的质量分数为：;;层析介质;常用层析介质;;硅 胶;琼脂糖; 琼脂糖的基本结构单位和亲水性凝胶结构 a 琼脂糖结构 b 亲水性凝胶结构 ;琼脂糖（2）;葡聚糖 ;纤维素;聚丙烯酰胺;亲和层析 ; 基质活化方法与配基偶联 ;活化方法（1）;溴化氰活化与配基偶联化学反应式 ; 活化方法（2）;环氧氯丙烷活化反应式 ; 环氧基的氨化及偶联配基反应 ;活化方法（3）;对甲苯磺酰氯活化反应式 ;手臂（spacer);D 残余电荷的掩蔽;手臂氨末端的掩蔽 ;残留羧基掩蔽反应 ;E 活化基团与配基密度测定;F 亲和介质吸附容量测定; 层析装置与操作;柱层析分离法的有关装置 ; Pharmacia ? KTA 层析系统 ; Pharmacia ? KTA 层析系统 ;装 置;装　　　柱;上样;淋洗（去除残留在介质中的杂质）;洗脱方法;恒定洗脱 ;分 步 洗 脱 ; (c) 梯度洗脱 ;清洗与再生;思 考 题;第二十二章 色层分离法（第二讲）;柱层析分离法的有关装置 ;装 置;装　　　柱;上样;淋洗（去除残留在介质中的杂质）;洗脱方法;恒定洗脱 ;分 步 洗 脱 ; (c) 梯度洗脱 ;清洗与再生;无机吸附剂;羟基磷灰石(HydroxyIapatite，简称HAP);;工艺条件;紫球藻B—藻红蛋白的分离纯化 ;藻红蛋白;吸附： 1mmol／L,PH 6.8 磷酸缓冲液 预平衡(1.8cm×4cm)层析柱 上样量:2mL 洗脱：磷酸盐缓冲液1、5、50、l00、200mmol／L ，PH 6.8，+ 0.1MOL/L NaCl溶液 洗脱速度:18mL/h 分步收集洗脱液(每管约4mL);B－藻红蛋白的洗脱曲线;体积排阻层析 Size Exclusion Chromatography 凝胶渗透层析 Gel Permeation Chromatography 凝胶排阻层析 Gel Exclusion Chromatography 凝胶过滤 Gel Filtration 分子筛层析 Gel Chromatography;凝胶层析的用途 ;特性参数 ;排阻极限;分级范围;吸水量(溶胀率);凝胶粒径（颗粒大小）;床体积;表示填充柱中凝胶粒子周围的总空间。 可利用平均分子量为二百万的可溶性蓝色葡聚糖来测出。;材料及性能要求;化学惰性;稳定性;刚性 ;可压缩担体柱的流速与压差的关系;孔径分布 ;思 考 题