湖北贝母有效部位提取工艺的研究.docVIP

　　湖北贝母有效部位提取工艺的研究 作者：徐仿周 陈昶 阮汉利 张勇慧 皮慧芳 吴继洲 【摘要】 　　目的优选湖北贝母有效部位即总生物碱的最佳提取工艺。方法 采用正交实验设计，测定不同提取条件所得总生物碱的含量及收率，结合各实验样品药理效应强弱的评价，优选出湖北贝母有效部位的最佳提取工艺。结果当提取条件为以50％EtOH提取3次，1 h/次，4倍体积/次时，湖北贝母有效部位总生物碱的收率最高，其镇咳和平喘的综合药效最强，经过稳定性验证后，将该工艺确定为湖北贝母有效部位的最佳提取工艺。结论该研究以化学指标和药效指标相结合的方法来优选湖北贝母有效部位的最佳提取工艺，相对单纯化学指标来说更为 科学 和可信，可以有效防止以单纯化学指标优选出的工艺与药理效应不一致时的偏差，使优选出的工艺真正为活性导向下药材有效部位的最佳提取工艺。 【关键词】 湖北贝母 正交设计 药效筛选 提取工艺 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of the active fraction (the total alkaloids) from the Bulbs of Fritillariae hupehensis. MethodsApplying orthogonal design in this study， ples of Bulbus Fritillariae hupehensis. And then um extraction process through assaying the total alkaloids yields of these samples and screening thEir antitussive, expectorant and antiasthmatic activities.ResultsETTER TOLEDO AG285型 电子 天平。 　　1.2 试剂湖贝甲素对照品，本教研室吴继洲教授提供；各种化学试剂，国产分析纯。 　　1.3 动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体重（20±2）g；豚鼠，雌雄兼用，体重(170±20) g，均由本校实验动物中心提供。 　 　2 方法与结果 　　2.1 总生物碱的含量测定采用酸性染料比色法［2，3］。 　　2.1.1 标准曲线的制备 精密称取湖贝甲素对照品10.00 mg，置50 ml容量瓶中，用氯仿溶解并加至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml置25 ml容量瓶中，加邻苯二甲酸氢钾缓冲液(pH=4.5)5 ml，溴甲酚绿2 ml，再加氯仿至刻度，充分摇匀，移入分液漏斗中，静置10 min分层，取下层液于415 nm波长处测定吸光度。将吸光度与相应的浓度作回归处理，得回归方程为A=7.095-3+2.644X，r=0.999 6 (A为样品溶液吸光度值，X为样品含生物碱的毫克量) 　　2.1.2 提取物中总生物碱含量的测定分别精密称取等量样品总生物碱浸膏适量，用氯仿溶解定容至50 ml，摇匀后分别精密吸取各样品液0.20 ml置于25 ml容量瓶中，加邻苯二甲酸氢钾缓冲液（pH=4.5）5 ml，溴甲酚绿指示剂2 ml，摇匀，加氯仿至刻度，按上述标准曲线下操作方法测定各样品的吸光度并 计算 各样品中生物碱的含量及产率。 　　2.2 正交设计考察提取时间、提取次数和溶媒体积在以往湖北贝母总生物碱提取分离研究的基础上，本文选取提取时间，提取次数和溶媒体积（50％EtOH）为考察因素，各因素相应安排了3个水平， 选用L9(34)正交表安排实验。因素水平的安排见表1。 　　将湖北贝母鳞茎研成粉末，过20目筛，分别称取该粉末80 g，按表1安排实验，回收并浓缩各提取液，经酸碱处理后，再以醋酸乙酯萃取，直至水层对Draggendorfs试剂不显色，回收醋酸乙酯萃取液并浓缩成浸膏。将各实验样品所得浸膏转移入已干燥至恒重的蒸发皿中，在相同条件下于60 ℃烘箱中干燥2 h，取出，置干燥器中冷却30 min后立即称重，计算各样品浸膏得率，并进行生物碱含量测定，计算各样品总生物碱的收率(%)。实验结果及方差分析见表2～4。 　　表1 L9(34) 因素水平设计（略） 　　2.3 药理效应评价［4］由于提取所得的活性部位除生物碱外还含有非生物碱成分，这些成分对总生物碱药效的影响并不清楚，所以若单纯以化学指标如生物碱产率的高低来优选最佳提取工艺，其药效是否最强仍未可知，由此，对这些提取浸膏做了进一步的药效筛选。 　　2.3.1 镇咳效应的筛选取体重(20±2) g小鼠，雌雄各半，随机分组（n=10），各组i.g给药1 h后，将小鼠置于倒置的50