血清igg的分离、鉴定201111.ppt

怎样用37%盐酸溶液配制成0.1mol/L的盐酸溶液？ 首先计算浓盐酸的体积，假设配1000毫升，盐酸的密度为1.19g/ml, 设需浓盐酸体积X毫升 1.19X*37%=0.1*1*36.5 求得X，量取X毫升制成1000毫升溶液即可。X为8.2毫升 试剂瓶外面的标签就有浓度。 附表： 盐酸密度与浓度对照表《化学品性质手册》 浓度(%)/密度(克/毫升) 1/1.0032 2/1.0082 4/1.0181 6/1.0279 8/1.0376 10/1.0474 12/1.0574 14/1.0675 16/1.0776 18/1.0878 20/1.0980 22/1.1083 24/1.1187 26/1.1290 28/1.1392 30/1.1492 32/1.1593 34/1.1691 36/1.1789 38/1.1885 40/1.1980 实验报告存在问题 DNA含量测定 定量实验试剂的浓度要标明、仪器型号记录 标准样品浓度换算 标准曲线过原点 浓度ug/mL，含量ug,% 思考题：判断核酸存在， RNA含量测定 定量实验试剂的浓度要标明、仪器型号记录 样品加样量中地衣酚的加样量为3mL 思考题：（1）特异性不强，具体改进方法 （2）本实验改进， 2个重复样测定 1. 标准曲线的制作及样品测定  IgG是免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)的缩写。根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgG是人的免疫球蛋白之一，其他还有lgA、lgM、IgD和lgE。 IgG相对分子质量为15-16万，沉淀系数约为7S。 IgG是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50％分布于血清中，其余分布在组织中。 Ⅰ.盐析法分离制备血清IgG 一、实验目的 掌握盐析法的原理及盐析法分离制备血清IgG的基本过程。 二、实验原理 两种现象： “盐溶”（Salting in）： 许多蛋白质在纯水或低盐溶液中溶解度较低，若稍加一些无机盐则溶解度增加，这种现象称为“盐溶” 。 “盐析” （Salting out）： 当盐浓度继续增加到某一浓度时，蛋白质又变得不溶而自动析出，这种现象称为“盐析” 。 现象原因： “盐溶”——极性基团增加——蛋白溶解度增大 “盐析”——水膜破坏——蛋白沉淀 中和电荷 蛋白质不同“盐析”出来所需的盐浓度不同，因此通过控制盐的浓度，使蛋白质混合溶液中的各个成分分步“盐析”出来，达到分离目的蛋白质。 饱和硫酸铵溶液法： 在蛋白质溶液的总体不大，要求达到饱和度在50%以下时，可选用此法。 在已知盐析处某个蛋白这成分所要达到饱和度时，可按下列公式计算应加入饱和硫酸铵溶液的数量： V=V0（C2—C1）/（1—C2） 式中： V0——蛋白质溶液的原始体积 C1——原来溶液中硫酸铵饱和度 C2——所达到硫酸铵饱和度 V——应加入饱和硫酸铵溶液体积 将计算所得体积的饱和硫酸铵溶液加入到混合蛋白溶液中，即可达到盐析的目的。 硫酸铵盐析法可使蛋白质的纯度提高约5倍，而且可以除去DNA、RNA等。但盐析后的蛋白质中仍含有一些杂蛋白，所以盐析的产品为粗分离产品，需要进一步纯化。 三、仪器、材料和试剂 　（一）实验仪器 　　 pH计，离心机，离心管等 　（二）实验试剂 　　　 （1）饱和硫酸铵溶液 （2）0.01mol/L，pH7.0的磷酸缓冲液 （三）实验材料 兔血浆 四、操作步骤与方法 1、计算各步滴加饱和硫酸铵溶液的量 2、清蛋白和球蛋白的分离： 离心管加入5mL血浆和5mL 0.01mol/L,pH7.0的磷酸盐缓冲液，混匀，边加饱和硫酸铵溶液边搅拌，使溶液最终饱和度为20%，4℃放置15min，3000r/min离心10min，弃去沉淀（沉淀为纤维蛋白原），其上清液为清蛋白和球蛋白。 +2.5mL饱和硫酸铵溶液 边滴加搅拌，防止局部过饱和的现象，达不到预期的饱和度。 搅拌时不要过急以免产生过多泡沫，致使蛋白质变性。 3. 球蛋白的分离： 新离心管称重并记录，量取1