微生物知识培训2007.ppt

乳糖胆盐发酵管：用于大肠菌群的测定。35g乳糖胆盐于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分加倍。 乳糖发酵管：大肠菌群证实试验用。 30g乳糖于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。 伊红美兰琼脂：用于大肠菌群的固体平板检测。 37.5g于1升蒸馏水中，摇匀，加热煮沸，121℃15分钟高压灭菌。 四、检测前培养基准备 检查预先经过灭菌处理的乳糖胆盐发酵培养基小导管内是否有气体。 按产品品种将培养基分别放在试管架内，同时将9ml 0.85%灭菌盐水管也放入相应的试管架内。 五、接种培养 （一）酸牛奶系列产品 酸牛奶系列产品接种单料乳糖胆盐发酵培养基9支管，分别接种样品量为1ml (原浓度)3支，0.1ml (10-1浓度)3支，0.01ml (10-2浓度)3支。 1、 1ml接种培养 在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时分别吸取1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 2、 0.1ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管吸取1:10的稀释液1ml于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:100的稀释液；同时分别吸取1ml 1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 3、 0.01ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml 1:100稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （二）活性乳酸菌饮料系列产品 活性乳酸菌饮料系列产品接种双料乳糖胆盐发酵培养基3支管，单料乳糖胆盐发酵培养基6支，分别接种样品量为10ml 3支，1ml 3支，0.1ml 3支。 1、 10ml接种培养 在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时用10ml灭菌吸管分别吸取10ml样品试液于3支双料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 2、 1ml接种培养 另用1ml灭菌移液管分别吸取1ml 样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 3、 0.1ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml 1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （三）证实试验 1、伊红美蓝琼脂平板分离 将产酸产气乳糖胆盐发酵管内的培养物分别接种于伊红美兰琼脂平板(划线分离)，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h。 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 平板分离画线法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 将伊红美蓝琼脂平板从培养箱取出后,观察菌落形态，并做革兰氏染色和乳糖复发酵试验。 革兰氏染色：见《革兰氏染色及镜检操作规范》。 （四）乳糖发酵试验 挑取可疑菌落进行革兰氏染色后接种乳糖发酵培养基，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察产气情况。 凡是革兰氏阴性无芽孢杆菌乳糖发酵管产酸产气的菌落即可报告大肠菌群阳性。 根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，查找每100ml样品内的大肠菌群的MPN值。 将检测结果填入《微生物检测报告单》，并及时传递给相关部门。 七、MPN单位介绍 MPN=Most Probable Number ，最大可能数 ，是一种利用统计学检测微生物的方法。 食品大肠菌群是以每克或100ML中大肠菌群的最近似值，是用MPN来表示。 采用9管法，对样品选三个稀释度，每个稀释度接种三管相应的培养基进行培养，然后根据情况做出判断阳性和阴性，再根据不同稀释度的阳性管数查表即可得到被测样品相应指标的MPN值。 多数酵母可以分离于富含糖类的环境中，比如一些水果(葡萄、苹果、桃等)或者植物分泌物(如仙人掌的汁)。一些酵母在昆虫体内生活。酵母菌是单细胞真核微生物，形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等，比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1~5