重组小鼠ck2 亚基在大肠杆菌中的表达纯化及.pdfVIP

11·60 · 中国药理学通报 　Chinese Pharm acological B ulletin 　2003 Oct ;19 ( 10) :1160～4 重组小鼠 CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定 梁景耀 　陈小文 　刘新光 　梁念慈 (广东医学院生物化学和分子生物学研究所 ,湛江 　524023) 中国图书分类号 　R 345 57 ;R 37821 ;R 3942 ;R 446 我们拟将已构建成功的小鼠 CK2α亚基的重组质粒 ( ) 文献标识码 　A 　文章编号 2003 1011604 进行诱导表达、纯化及测定其活性。为今后细胞和 摘要 　目的 　研究重组小鼠 CK2α亚基在大肠杆菌中的表 动物实验打下坚实的基础。现将结果报道如下。 达 ,并进行纯化和活性的测定。方法 　将已构建成功的小鼠 1 　材料与方法 α 蛋白激酶 CK2 亚基 cDNA 的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL21 1 . 1 　材料 (DE3) , IPTG 诱导表达 ,产物依次进行 DE52 、P11 磷酸纤 1 . 1 . 1 　菌株与质粒载体 　大肠杆菌 BL21 (DE3) 由 维素和肝素Sepharose 柱层析分离 , SDSPA GE 银染。结果 卫生部武汉生物制品研究所引进 , 原核表达载体 　重组质粒转化表达菌经 IPTG 诱导后出现一分子量为 42 p T77 由美国哈佛医学院的 Tabor 教授惠赠。 ku 蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 306 % 。从 1 . 1 . 2 　试剂 　异丙基硫代半乳糖苷 ( IPTG) , 287 mg 可溶性蛋白质中得到 4 7 mg 纯化蛋白。SDSPA GE 银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的 CK2α和 β亚 DNase I , A TP , GTP , 亮抑酶肽 , 胃抑酶肽A , 硝 基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的 CK2 酸纤维膜购自 Sigma 公司 , DE52 , P11 磷酸纤维素 全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。结论 　重组蛋 和 P81 磷酸纤维素滤纸系 Whatman 产品 , 5 ml E 32 γ 白是小鼠蛋白激酶CK2α亚基。 conoPac 肝素亲和层析柱为 BioRad 产品。[ P ] 32 γ A