第一章 植物组织培养实验室的构建与操作技术.ppt

第二章 植物组织培养实验室 　的构建与操作技术 主要内容 组织培养实验仪器设备及使用方法 培养基的制备方法和步骤 外植体的灭菌方法 无菌操作技术 褐变和玻璃化原因及应对措施 第一节　植物组织培养实验室及主要设备 　实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计，达到严格无菌的条件 组培的常见技术路线： 外植体→愈伤组织→不定芽→生根→再生植株 基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理（脱分化、再分化、继代） →再生植株 功能：进行一切与实验有关的准备工作 器皿洗涤、药品的配制 培养基配制与分装 培养基和培养器皿的灭菌 培养材料的预处理等 要求： 明亮、通风 便于多人同时工作 地面应便于清洁，并应进行防滑处理 准备室主要仪器设备： 工作台 药品柜 冰箱 普通冰箱、低温冰箱等。主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。 天平 感量0.001g的分析天平、感量0.0001g的电子天平（用于称量微量元素和一些较高精确度的实验用品）、感量为0.1g的托盘天平（用于称取用量较大的糖和琼脂等） 放置在水平、干燥、不受震动的操作台上 (5)恒温水浴锅 (6)蒸馏水发生器 蒸馏水用于配制母液或培养基（普通实验可以用自来水代替蒸馏水） (7)电炉 (8)高压灭菌锅 进行培养基、水和器械用具的灭菌 (9)酸度计 测定培养基及酶制剂的pH值（普通实验可使用pH试纸） (10)烘箱 干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌 和测定干物重 (11)摇床 振荡培养 (12)离心机 分离培养基中的细胞以及解离细胞壁后的原生质体 ２、缓冲室（注意门的朝向） 工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩 功能 减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 要求 缓冲间需3-5平方米，应保持清洁无菌； 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 1-2盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进行灭菌。 ３、无菌操作室（接种室） 功能 外植体消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备等 要求 环境干爽，清洁，居于上风位 空间宜小不宜大 地面、天花板及四壁密闭光滑，无卫生死角 室内物品越少越好，尽可能减少空气流动 维护方法 定期消毒（紫外线照射、气雾熏蒸、药品喷洒） 及时维护（干燥、洁净） 接种室主要设备及用具 接种箱 主体为玻璃箱罩、入口有袖罩 超净工作台 操作台面半开放，方便、操作舒适；通过过滤的空气连续不断吹出，大于0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留 解剖镜 分离微茎尖、转基因等 无菌操作用的器具 酒精灯、镊子、解剖刀，解剖刀片、剪刀、培养瓶，刀剪架等 ４、培养室 功能 接种的材料进行培养生长的场所（其设计以充分利用空间和节省能源为原则）。 要求： 能控制光照和温度 保持相对的无菌环境 有排风窗和换气扇等培养室的换气装置 有适宜的培养架，日光灯照明。 主要设备 培养架、培养箱、空调机、除湿机、换气扇、臭氧发生器等。 二、培养器皿及用具 1、培养器皿（包括玻璃器皿和塑料器皿） 各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。 2、微孔过滤器（细菌过滤器） 0.45微米，抽滤灭菌用，如激素 3、器械用具 镊子、剪刀、解剖刀、接种针（铲）等。 思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 第二节　培养基及其配制 定义： 培养基(culture medium)——根据植物生长所需营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。是植物组织培养的重要基质。 不同植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同 没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官 找到一合适的培养基，是培养成功的基础。 一．培养基成分 主要为： 水 无机盐 有机化合物 生长调节物质 培养体的支持材料 １．水 水是植物体的重要组成成分，是一切代谢过程的介质和溶媒，是生命活动过程中不可缺少的物质。 培养基大部分是水（固体培养基 约75—80%）　　 天然水或自来水不能直接用于培养基配制 原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般应用双蒸水或超纯水。 大批量快