ZFP580在ROS介导的心肌细胞氧化应激损 伤中的作用.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………4 英文缩写…………………………………………………………………8 研究论文 ZFP580 在ROS 介导的心肌细胞氧化应激损伤中的作用 前言 ………………………………………………………………10 材料方法 …………………………………………………………10 结果 ………………………………………………………………24 附图 ………………………………………………………………28 附表 ………………………………………………………………35 讨论 ………………………………………………………………38 结论 ………………………………………………………………39 参考文献 …………………………………………………………40 综述 氧化应激及活性氧自由基在心血管疾病中的作用…………43 致谢………………………………………………………………………55 个人简历…………………………………………………………………56 万方数据 中 文 摘 要 ZFP580 在ROS 介导的心肌细胞氧化应激损伤中的作用 摘 要 目的：氧化应激(oxidative stress)是由于机体活性氧(Reactive oxygen species, ROS)产生增多与抗氧化系统之间平衡失调应起的一系列适应性 的反应。对人类而言，氧化应激涉及许多疾病，如帕金森氏病和阿兹海默 病等。在心血管系统疾病中，如心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia / reperfusion injury ，MI/RI) 、动脉粥样硬化及高血压等均发生了氧化应激 损伤。而ROS 作为氧化应激的核心成分，在该过程中起到至关重要的作 用。ROS 既可以直接引起组织细胞损伤，又可以通过有关信号转导通路， 如MAPK 通路、NF-KB 通路等间接引起生物学效应。近年来，MAPK 通 路在氧化应激中的作用日益受到关注。本组在前期的研究工作中筛选人主 动脉 cDNA 文库，得到一个 cDNA 全长为 1726bp 的锌指蛋白新基因 ZNF580 。该基因编码172 个氨基酸组成的蛋白质，其N 端为脯氨酸富含 域，C 端为含有三个串联重复的C2H2 型锌指蛋白结构域，其蛋白结构与 Sp/KLF 家族成员相似。ZFP580 是本试验室随后克隆的与ZNF580 同源的 鼠源性基因。本组通过前期实验已经发现，H O 可以诱导 ZNF580 表达 2 2 升高，且ZNF580 可以受到NF-KB 及P38 MAPK 通路的调节。故本实验 旨在通过H O 体外刺激H9C2 大鼠心肌细胞探讨ZFP580 在ROS 介导的 2 2 心肌细胞氧化应激损伤中的作用。 方法:使用不同剂量H O 刺激H9C2 细胞不同时间，筛选适宜的刺激 2 2 浓度及时间，对照组加入等量的DMEM 培养基。MTT 法检测细胞活性； 检测细胞上清中LDH 活性；Realtime-PCR 测定ZFP580 、IL-6 及TNF-α mRNA 表达水平；Western-blot 检测ZFP580 、P38 MAPK 、phospho- P38 MAPK 、caspase3 及 cleaved-caspase3 的蛋白表达；使用慢病毒过表达