重组羧肽酶原B甲醇酵母的构建与分泌表达.pdfVIP

食 品与药品 Food an d Drug 2008 年第 10 卷第 11 期 5 重组羧肽酶原B甲醇酵母的构建与分泌表达 李素霞 ，袁勤生 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 2002 37 ） 摘 要 ： 目的 构建重组羧 肽酶原 B 甲醇 酵 母工程 菌株 。方 法 将 羧肽酶原 B 编码基 因整合 入 酵母 质 粒， 电转 化 至 甲醇酵 母中，Hi s 缺陷培 养基 和 G4 1 8 抗性 筛选 获得 阳性 克隆株 。用 大肠 杆菌表达 的羧肽 酶原 B 免疫 家兔制备羧肽 酶 原 B 兔抗 血清 ；经发酵、 甲醇诱 导后 ，蛋 白质 印迹 （We s t e r n - b l o t t i n g ）免疫 检测 蛋 白质的表达 。结果 获得 高 抗 体 滴度 的羧 肽酶 原 B 兔抗血 清 ，蛋 白质 印迹免疫 检测 重组 酵 母经 甲醇诱 导表 达 后的上 清阳性。结论 获得了重组 羧 肽 酶 原 B 甲醇 酵 母工程 菌株 ，可 分 泌表 达 重 组羧肽 酶 原 B 。 关键 词：羧 肽 酶 原 B ； 甲醇 酵 母；表 达 ；多克 隆抗 体 制 备；蛋 白质 印迹 中 图分类号：Q556 文献标识码：A 文章编号：1672- 7 X( 200 8) 11- 0005- 03 Const r uct i on and Secr et ed Expr essi on of Recombi nant Pr ocar boxypept i dase B i n Pi chi a past or i s LI Su-xi a, YUANQin-sheng (St at e Key Laborat ory of Bi or eact or Engineer ing, East China Univer sit y of Sci ence and Technol ogy, Shanghai 200237, China) Abst r act：Obj ect i ve To const r uct t he r ecombi nant pr ocar boxypept i dase B i n Pi chi a past ori s. Met hods The yeast pl asmi d cont aining pr ocar boxypept i dase B codi ng gene was const ruct ed, and t hen t ransfer red t o Pi chi a past ori s . The posit ive cl one was obt ai ned by G418 r esi st ance s el e ct i on i n Hi s - me di um. Th e r a bb i t a nt i -rat 收稿 日期：2008- 03- 06 作 者简介：李素 霞，副 教授 ，博士 ，硕士生导师 ，研 究方向为酶与