编号生物农药研究中心[2009-09-01]共5页.docVIP

编号：生物农药研究中心[200-09-01] 共 页 承担单位：福建省农科院课题编号：课题名称： 课题负责： 子课题名：子课题号：子课题人： 子项目名： 试验项目： 试验人员： 试验负责：报告日期：计数月份：月份 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院生物技术研究所 生物农药研究中心 电话: 0591 传真: 0591 试验目的绿色荧光蛋白(green fluorescent proteinGFP)于1962年由Shimomura 等[]首先从发光水母(A．victoria)中纯化出来一种功能独特的蛋白质，分子量为27KD，具有238个氨基酸。1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA并分析了GFP的一级结构，1994年Clmlfie等最早用重组野生型GFP做报告基因，成功地在原核和真核生物中得到表达。之后，以GFP为报告基因成为基因转移研究领域的热点之一，并成功应用于多种转移研究系统和靶细胞。GFP基因是一种良好的标记物，它与目的基因融合后，对目的基因的结构和功能没有影响，大量表达对细胞也无毒性作用，细胞仍可连续培养。GFP基因在异源细胞内表达后，能自发产生荧光蛋白，借助荧光显微镜，可进行活细胞实时定位观察，更能接近自然真实状态，使研究更为方便。由于GFP基因具有种种无比可比拟的优点，在短短的十年时间里，它已经被广泛应用于真菌的研究中GFP基因将带有GFP基因的质粒通过转化随机插入待研究的目标菌株的基因组中，再筛选出GFP基因稳定表达的转化子用于各种研究目前，球腔菌属旋孢腔菌 柄孢壳菌属裂褶菌Chen [2]用GFP对刺盘孢属的Colletotrichum destuctivum和Colletotrichum orbiculare进行了转化，得到了一个能发荧光的转化子，其生长速度及表型与原始菌株一样，侵染烟草时其菌丝结构的出现时间及表型与原始菌株相同，因此GFP基因是检测真菌在寄主中的生长速率的一个精确、快速和简便的方法。Fusarium graminearum是大麦和拟南芥的一种病原菌．它侵染植物种子造成种子重量减轻以及毒枝菌素积聚。Skadesen等[]人用GFP转化了，详细研究其对大麦和拟南芥的侵染模式。Sexton等[]也利用GFP标记油菜黑胫病菌Leptosphaeria maculans研究其与油菜的互作。最近Atkin等[]又成功地用GFP基因标记了食线虫真菌Pochonia chiamydosporia。而在疫霉方面，Pieter van West等[]也利用GFP基因作为报告基因研究棕榈疫霉Phytoghthora palmivora生活史某些阶段以明确其分子生理作用。同时，Arnaud Botun等[]也利用PEG介导转化烟草寄生疫霉Phytoghthora parasitica var.nicotianne标记上GFP基因,观察其与烟草的互作。综上所述，用GFP基因标记病原真菌对于病原真菌的深入研究是非常有意义的。国外已有GFP基因标记报道(Fusarium oxysporum f opersici (SaCC)snyder et Hansen)引起的一种维管束疾病，番茄枯萎病的病原为Fusarium oxysporum(Sch1) f．sp lycopersici[sacc]snyderet et Hansen，称番茄尖镰孢菌番茄专化型[9]。以绿色荧光蛋白为报告基因，对于深入研究尖孢镰刀菌在番茄植株中的侵染等有重要的意义。本实验已经建立起相对稳定对番茄枯萎病病原菌转绿色荧光蛋白遗传转化体系。 2．试验方法(PSA)；马铃薯液体培养基(PSB)；