现代组织化学原理及应用-科学技术文献.pdf

第 1 页 酶组织化学是通过细胞 内的酶催化底物 的作用并借助显色反应在切片或涂片上显示组 织或细胞 中内源性酶 的活性及定位 的方法 。自 于 年首次采用这一方法显示组 织中的过氧化物酶 以来 ，已近 年的历史，但直至 世纪，酶组织化学才得到长足发展并 成为组织化学 中一 门独立 的分支 。 目前用这一技术显示 的酶 已逾一百种 。 世 纪 年 代 后 ，随着免疫组织化学技术 的不断开拓，酶组织化学的发展趋缓 ，免疫组化与酶组织化学相 比虽有许多优点，但在某些方面前者并不能完全代替后者，故酶组织化学仍有应用价值 。 酶 组 织 化 学 的 原 理 及 一 般 原 则 酶组织化学的基本原理 酶组织化学就是利用细胞内的酶催化分解合适的底物，生成中间产物，即初反应产物 （ ，简称 。然后其 中之一再与辅助物经一或二步反应生成有色不溶的 终反应产物（ ，沉积在原位 以显示酶的存在 。在此过程 中可能会出 现 的弥散而造成定位不准确 。弥散受三个 因素左右，一是底物在酶催化下水解的速度 ； 二 是 在缓冲液中的弥散系数；三是 与辅助物反应 的速度 。选择合适 的底物和辅助物 可 以使水解反应和 与辅助物 的反应迅速进行 以减少弥散，有时辅助物的浓度过高不但会 抑制酶的活性 ，而且还会影响 的形成 ，一般 以不超过 为 宜 。 酶组织化学 的一般原则 酶组织化学欲取得满意的结果，必须遵循一些基本的原则，它们是： 对标本 的处理和制片过程不能影响酶的活性及分布 ； 所选择 的底物和辅助物必须能迅速和 同步地渗透到组织和细胞 中去； ）所选择的底物最好只能被一种酶催化分解； 所选择 的辅助物不 能影 响酶 的活性和其他反应剂 穿透进入细胞 ； 必须能迅速与辅助物进行反应 ，且 是水不溶性的有色而稳定的物质 ； 所有参加反应 的试剂都不能与组织细胞 内除了所检测 的酶 以外 的任何成分 自行 吸 附或结合。 酶组织化学对 组织处理 的要求 组织经一般 固定剂 固定、常规石蜡包埋 的方法处理后酶 的活性几乎都会丧失，仅极少数 情况例外 （如氯乙酸酯酶），除非针对具体的酶使用特殊的固定剂和特殊的包埋方法，才可 以 部分保持酶的活性，如用丙酮固定，低温乙醇脱水，低温石蜡包埋，可部分保持大 鼠肝脏 内的 谷氨酰 转肽 酶 的活性 。所 以酶 组织化学 一般 都使用 冷冻 切 片 。新 鲜组 织立 刻用 液氮 速 冻 ，为 了使组织结构保持得更好 ，也可使用经液氮冷却的异戊烷 。速冻 时最好 第 2 页 使组织包埋于 以便容 易切片 。速冻 的组织在 酶的活性仍易丢失，故只能短期 暂存，如要长期保存组织块，应置于 ℃。在冷冻保存 时，还要 防止水分蒸发使组织变 干 。冷冻切片在染色前可 以预固定也可 以不固定，为了使组织形态结构保持 良好 ，常用低浓 度（ ）的多聚甲醛 、甲醛或戊二醛进行预固定 。其中甲醛能较好地保持酶的活性 。 细胞涂片和培养细胞在制备后应迅速使其干燥 ，以保持酶的活性 ，在干燥 的情况下 ，室 温可 保存 数周 ，相 反 ，放在 ℃冰箱或无包装放在 ℃常使酶失活 。如想保存较长时间， 则应密封放在 ℃ 。 酶 显 示 方 法 酶组织化学中酶的显示方法众多，归纳起来，有以下几类： 同步 显