r草莓伪温和黄边病毒提纯技术的研究VirologicaSinica.PDF

维普资讯 7r 簟6卷第4船 中 国 囊 ● 拳 Vo1．6 N0．4 1991年l明 VIROLOGICA SINICA Dee．1991 草莓伪温和黄边病毒提纯技术的研究 吴元华 韦石泉 一 一 — — ， — — — — 一 — — — P (沈阳在业 大学，沈阳 llG161) 2． } 提 要 纯化的草莓伪温和黄边病毒(SPMYEV)，小叶嫁接繁殖于指示植物草莓 UC--4上 ．然 后采样榨汁 ，结合豪乙=醇(PZO)沉淀 ．蔗糖垫底差速离心及连续 蔗糖密度梯度离心．能 成功地将 草莓伪 温和黄边病毒提纯 出来 。经 电镜观察为丝杆状病毒粒俸 ．长 ×宽 为 650am ×l2—13am。提 纯的病毒制剂 ．经 紫外分光光度计 测定 ．呈典型 的核蛋 白吸收曲线，其 最 大值位于263nm，最小值位于243nm A260／A280—1．24，用冰醋酸分解病毒 ，提取表壳 蛋 白，经SDS一聚丙烯 酰胺 凝胶 电泳测 定其分 子量约37000道 尔顿 。 关键调 ：草莓伪温和黄边病毒 提 纯程序 衣壳蛋 白 草莓伪温和黄边病毒 (Strawberrypseudo—mildyellowedg~virus，SPMYEV)国 内外研究较少，据知它可能属于荷兰香石竹潜隐病 毒 组 (Carlavirusgroup)的一新成 员 l。目前尚未找到其它适宜的繁殖寄主，敞病毒仍须繁殖于草莓株上。由于提纯病毒 所用的感染病毒的草莓叶，在其榨汁中含很多的多元酚及单宁等物质，这些物质在榨汁 过程中，易引起该病毒在生体外的集聚或钝化 ”。此外，本病毒在草莓组织中含量很 低，因此，从草莓中直接提纯SPMYEV显然相当困难 。我们经过多次试验 ，摸索到一种 较好方案，能够较满意地从染病草莓中提纯这种SPMYEV。 材 料 和 方 法 一 、 供试寮毒 将从春 香品种上分离纯化的SPMYEV (本棱植保系植物病毒研究室保存 )，以 小叶嫁 接接种法繁殖 于指示植 物草莓UC一4上 ，采 收病 叶及叶柄 ，用作提 纯试验 的材料 二 、寮毒撮纯 设计 了几种 提纯程序，包括不 同抽提缓冲液 ，不同有机 溶 剂 及 豪 乙 二 醇 沉 淀 、蔗糖垫底差速离心及连续性蔗糖 密度梯度离心等试验 。 三 、电键观察 提纯的SPMYEV样 品置于载网，经2和磷钨酸pH 7．0负染 5分钟， 自然干燥后 进行 电镜观察 (JEM一100cx)。 四、SPMYEV衣壳蛋 白质的分鼻疑分子■一定 表壳蛋 白质分离参照 Fraenkel—conralI|的 冰醋酸法操作。 采用SDS-豪丙烯酰胺 电泳法恻其分子量 (凝腔浓度为 10嘶， 内含 0．1和SDS) 电 }jc板以考 本文于1901年 3月 l1日收到．4月 4日修回。 维普资讯 中 国 病 毒 学 第0卷 马斯亮 兰染色 ， 甲醇一冰醋酸脱色 ， 标 准蛋 白质样 品， 选 用 了 枉糖 桉酸 酶 (ribonuelease，MW 37000)，胰凝乳蛋 白酶元A (chymotrypsln，MW 25000)，卵清蛋 白 (albumin，M W 430