FSHβ在骨形态蛋白9诱导小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化中的作用研究.pdfVIP

重庆医科大学学报 2017年第42卷第 3期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2017．Vo1．42No．3) 一 327 一 DOI：10．13406~．cnki．cyxb．001200 FSHI3}在骨形态蛋白9诱导小鼠胚胎成纤维细胞 成骨分化中的作用研究 苏晓娅 ，黄 敏 ，刘 宏 (重庆医科大学附属第一医院生殖健康与不孕症中心，重庆 400016) 摘【 要】目的：探讨卵泡刺激素p亚基(follicle-stimulatinghormoneB，FSH31)对骨形态发生蛋白9(bonemorphogenetieprotein9， BMtO)诱导小鼠胚胎成纤维细胞 mouseembryonicfibroblasts，MEFs)成骨分化中的作用。方法：采用AdEasy系统构建表达绿色 荧光蛋 白(greenfluorescentprotein，GFP)、FSH31和BMP9的重组腺病毒 (Ad—GFP、Ad—FSH31和Ad—BMP0)，实验分组为：Ad— GFP组、Ad—BMP9组、Ad—FsHB组和Ad-BMP9+Ad—FSH31组。运用化学发光定量和组织化学染色法分别检测各组3、5、7d碱 性磷酸酶 (alkalinephosphatase，ALP)活性；Westernblot检测成骨分化早期转录因子(Runx2和DLX5)的蛋白表达水平；RT—PCR 检测成骨分化晚期指标骨钙蛋白(osteocalcin，OCN)和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)的mRNA表达水平；茜素红染色检测钙盐沉 积；流式细胞技术检测各实验组细胞的周期分布。结果：在 MEFs中，过表达 FSH31能明显促进 BMtO诱导MEFs骨化过程中第 3天(6874．67-4224．93vs．11935．67-4568．76，P=0．000)、第 5天(43434．67-t-2047．57vs．98913．33±4606．26，P=0．000)、第 7天 (38198．oo4-2376．43vs．78534．67-42114．56，P=O．ooo)的ALP活性 ，转录因子 Runx2(1．171-40．105vs．1．350-i-0．053．P= 0．026)、DLX5(1．3824-0．123vs．1．738-40．286，P--0．001)和晚期成骨指标 OCN(1．300-40．405vs．1．471±0．406，P=O．002)、OPN (1．300-40．084vs．1．479-40．038，P=-0．016)的表达水平，以及钙盐沉积。此外，FSH31和(或)BMP9对 MEFs细胞周期没有明显影 响(G1期 ：F--0．226，P=-0．876；G2期 ：F--0．147，P=-0．929；S期 ：F=0．027，P=0．994)。结论：在不影响MEFs细胞周期的情况下，FSH31 协同BMtO诱导MEFs成骨分化。 【关键词】骨形态发生蛋白9；卵泡刺激素B亚基；小鼠胚胎成纤维细胞；成骨分化 【中图分类号】R322．54；R322．71；R329．2 文【献标志码】A 【收稿日期】2016—07—30 RoleofFSHI3inBMP9-inducedosteogenicdifferentiation inmouseembryonicfibroblasts SuXiaoya，Huang n．LiuHong (DepartmentofReproductionHealthandInfertility。 eFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity、 A【bstract]Objecave：Tostudytheeffectoffollicle—stimulatinghomroneB(FSH31)onbonemorp