高效液相色谱演示实验.pdf

高效液相高效液相色谱色谱演示实验演示实验 高效液相高效液相色谱色谱演示实验演示实验 石向群 九江学院分析测试中心 双黄连胶囊黄苓苷含量测定色谱条件双黄连胶囊黄苓苷含量测定色谱条件 双黄连胶囊黄苓苷含量测定色谱条件双黄连胶囊黄苓苷含量测定色谱条件 1、色谱仪器、色谱仪器：：Varian HPLC ，配有ProStar230泵、 、、色谱仪器色谱仪器：： ProStar325UV检测器、手动进样器和柱温箱。 2、色谱工作站、色谱工作站：：Star6.4 HPLC Workstation 英文版 、、色谱工作站色谱工作站：： 3、色谱柱、色谱柱：：Varian C18柱(5 μm，4.6mm ×150mm)。 、、色谱柱色谱柱：： 4、流动相、流动相：甲醇： :水:冰醋酸= （50：50：1）。 、、流动相流动相：： 5、检测波长、检测波长：：274nm，采样时间15min。 、、检测波长检测波长：： 6、柱温、柱温：：25℃ 、、柱温柱温：： 7、对照品、对照品：黄苓苷： ；样品；样品：双黄连胶囊： 。 、、对照品对照品：： ；；样品样品：： 液相色谱基本理论液相色谱基本理论 液相色谱基本理论液相色谱基本理论 液相色谱基本概论定义公式液相色谱基本概论定义公式 液相色谱基本概论定义公式液相色谱基本概论定义公式 液相色谱仪硬件液相色谱仪硬件 液相色谱仪硬件液相色谱仪硬件 液相色谱仪器结构组成示意图液相色谱仪器结构组成示意图 液相色谱仪器结构组成示意图液相色谱仪器结构组成示意图 液相色谱仪器组成液相色谱仪器组成 液相色谱仪器组成液相色谱仪器组成 溶剂传输系统 （泵系统） 进样系统 工作站 组分收集 （选相） 检测器 流动相导论流动相导论 流动相导论流动相导论 溶剂系统 • 可以是一种或多种水溶液或有机溶剂 • 携带样品流经色谱柱至检测器 • 当与样品发生相互作用时，样品则发生分离 流动相： 甲醇：水：冰醋酸= （50：50：1） HPLC用水用水 用水用水 HPLC用水 HPLC应用中要求超纯水，如检测器基线的校正和反相柱 的洗脱。 超纯水电导率>18 M Ω·cm）。 HPLC级水增加吸收特性：在1cm池中，用作空白，在 190nm、200nm和250~400nm 的吸收度分别不得过 0.01、0.01和0.05 。增加不挥发物，≤3ppm （中国药典 纯水≤10ppm）。 流动相的准备流动相的准备 流动相的准备流动相的准备 配置流动相 • 混合 、过滤 、除气 溶剂的混合 • 每一组成的溶剂在混合前必须分 开测量体积再混合 • 两种溶剂混合后的体积通常不是 分开体积的总和 流动相的准备流动相的准备—过滤过滤 流动相的准备流动相的准备 过滤过滤