薄层解析色谱法基础.ppt

薄 层 色 谱 法（Thin-layer Chromatography，TLC） 目 录 一 前言 二 基本参数 三 薄层层析的操作 四 特殊的薄层 五 应用举例 薄层色谱与液相色谱法比较 薄层色谱与柱层析和纸层析比较 (1)快速(数十秒~数十分钟) (2)分离效率高(多柱路) (3)灵敏度高 (斑点扩散小,比纸色谱高10-100倍) (4)显色方法多样(腐蚀性显色剂) (5)图象易保存 二. 基本参数 三.薄层色谱的操作 吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定 (一) 薄层层析用的吸附剂 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。 吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等； 其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其价格等。 (三)薄层层析中展开剂的选择 主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。 各种展开剂按其极性不同排序为： 烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<酯类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸 选择薄层条件的简图 Stahl设计的用以选择薄层条件的简图 （1）为被分离化合物的极性（2）为吸附剂的活度（3）为展开剂的极性。若将这三个因素各自固定在圆周的三分之一，转动圆盘正中的三角形，如果角A指向极性物质，则角B指向活度小的吸附剂，角C就指向选用极性展开剂；如转到A’，B’，C’处则又要作另外的选择组合。 极性较大的溶剂可以使化合物在薄层上移动。 极性较小的溶剂降低极性大的溶剂的洗脱能力，使Rf值降低。 中等极性的溶剂往往起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。 在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高分离度。 用粘度太大的溶剂时需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘度，加快展开速度。 例如环己烷-丙酮-二乙胺-水（10:5:2:5）这个系统中， 水是极性大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的Rf值，丙酮起着混匀整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量二乙胺的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。 微量圆环技术 将试样溶液点于已准备好的薄层上，点成同样大小的圆点，用毛细管吸取各种经初步选择认为可能应用的展开剂，加到试样点中心，让展开剂自毛细管中慢慢流出进行展开。 (四) 点 样 1.样品溶液 一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样，配成0.5%~1%的试液。 2.点样量 点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用量为几至几十μg，制备型的分离可以点样到mg量。总之点样量随分离目的而定。 3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。 常用的点样方式 4. 点样容器 定容毛细管 微量注射器 点样器 (五) 展 开 1. 水蒸气的影响 2. 溶剂蒸气的影响 3. 展开槽 4. 展开方式 5. 几种新型的展开技术 6. 展开操作 1.水蒸气的影响 在吸附薄层色谱的展开过程中，空气的相对湿度以及展开槽中的水蒸气必须严格控制，微量的水也能对色谱分离结果产生较大的影响。 硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄层板在50%相对湿度中约3分钟就失去活性的一半，而15分钟时吸附的水分已达到最大值，因此，点样速度的快慢，空气相对湿度的大小，都可以影响分离以及重现性。 适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂的极性。 2. 溶剂蒸气的影响 “边缘效应”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）为展开剂展开麦角生物碱时发现，对同一种生物碱，在薄层板中部的Rf值比在边缘的Rf值小，称此现象为“边缘效应”（edge effect）。 展开槽中被展开剂蒸气饱和后再进行展开就可以消除。 3.展开槽 普通展开槽 双底展开槽 水平展开槽 4.展开方式 (1)近水平展开：将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm，薄层上端垫高使薄层与水平成5-10o的角。 (2)上行展开：将点样后的薄层放在盛有展开剂的直立型的展开槽中，展开剂由薄层下端借毛细管作用上升至前沿。 (3)下行展开 (4)双向展开 几种新型的展开技术 (1) 程序蒸气展开（Vapor-programmed，VP） (2) 圆形色谱（Ra