江南大学微生物实验技术(复试)-2013-03-17.doc

江南大学微生物实验指导 实验一 显微镜的构造及使用方法 一、目的要求 了解显微镜的构造、性能及成像原理。 掌握显微镜的正确适用及维护方法。 二、实验器材 显微镜、纱布、绸布 酵母菌示教标本 三、普通光学显微镜简介 微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。 显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。 （一）显微镜的构造 普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。 图1-1 显微镜构造 1.目镜 2.镜筒 3. 转换器 4. 物镜 5. 载物台 6. 聚光器 7. 虹彩光圈 8. 聚光镜调节钮 9.反光镜 10. 底座 11. 镜臂 12. 标本片移动钮 13. 细调焦旋钮 14. 粗调焦旋钮 15.电源开关 16.光亮调节钮 17.光源 机械系统： 镜座Base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。 镜臂Arm：连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。 镜筒Tube：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和斜筒式；有单筒式的，也有双筒式的。 旋转器Nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的接物镜。 载物台Stage：是支持被检标本的平台，呈方形或圆形。中央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。 调焦旋钮：包括粗调焦钮Coarse adjustment knob和细调焦钮Fine adjustment knob，是调节载物台或镜筒上下移动的装置。 2. 光学系统 接物镜Objective lens，常称为镜头，简称物镜，是显微镜中最重要的部分，由许多块透镜组成。其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜有3~4和物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。干燥系物镜包括低倍物镜（4~10x）和高倍物镜（40~45x），使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90~100x）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质。 接目镜Eyepiece lens：通常称为目镜，一般由2~3块透镜组成。其作用将由物镜所形成的实像进一步放大，并形成虚像而印入眼帘。一般显微镜的标准目镜是10x。 聚光镜Condenser：位于载物台的下方，由两个或几个透镜组成，其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄。聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上下调节，以求得最适光度。聚光器还俯有虹彩光圈（Iris diapHragm）,此调节锥形光拄的角度和大小，以控制进入物镜的光的量。 反光镜：反光镜是一个双面镜，一面是平面，另一面是凹面，起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用。使用内光源的显微镜就无需反光镜。 光源：日光和灯光均可，以日光较好，其光色和光强都比较容易控制，有的显微镜采用装在底座内的内光源。 （二）显微镜的成像原理 显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立实像，再经目镜进一步放大形成一个虚像，被人眼所观察到（图1-3）。 在油镜系中，载玻片与镜头之间多用香柏油作介质。因香柏油的折射率（n=1.51）与玻璃的折射率（n=1.52）几乎相等，故透过载玻片的光线通过香柏油后，直接进入物镜，而不发生折射。两组物镜光线通路的区别如图1-4所示 图1-3 显微镜成像原理 图1-4物镜光线通路 （三）显微镜的性能 1. 分辨率和数值口径 衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分辨率，显微镜的分辨率（Resolving power）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。它主要取决于物镜的分辨能力，物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数。分辨率用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示： 物镜的数值口径（Numberical aperture），简写为（N.A）：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上，能被物镜所聚集的量。可用公式表示： n——标本和物镜之间介质的折射率 θ——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角 光线投射到物