第四篇细胞的凋亡.ppt

APOPTOSIS 细胞凋亡概念 ( Apoptosis overview) 细胞凋亡的特征(Apoptosis Speciality) 细胞凋亡的检测方法(Detection methods for apoptosis) 细胞凋亡研究发展远景(A bright Future) 一.细胞凋亡的概念 ( Apoptosis idea) 　 细胞死亡分为正常死亡和非正常死亡 非正常死亡:主要指由超细胞承受环境因素引起的死亡. 正常死亡:⑴自然衰老导致的死亡 ⑵神经内分泌调节导致的死亡 ⑶细胞程序性死亡(PCD) PCD：是指健康细胞发生的、由基因决定的死亡过程——也称细胞凋亡。 1.细胞凋亡是一个主动的、由基因决定的自杀过程！ 2. 细胞凋亡是维持机体环境稳定的重要因素! 3. 细胞凋亡对免疫系统具有重要意义! 二)细胞色素C(Cyt C) 位于膜间腔的Cyt C由于线粒体的损伤而被释放入胞浆,使胞浆内此酶含量增高,通过测定其活性可以辨别细胞是否凋亡。 Cyt C一旦进入胞浆，可结合凋亡激活因子—1，诱导其寡聚化，再聚集Pro-Caspase-9形成凋亡复合体最后导致细胞凋亡。  胞浆内Ca2+水平升高；一是胞内钙库释放，二是胞外钙内流，由于钙的持续升高，作为启动凋亡的信号，而触发凋亡。 胞浆内PH的升高，也是触发凋亡的起始信号。 三.细胞凋亡检测方法(Detection methods for apoptosis) (一)形态学检测 形态学检测是鉴定细胞凋亡最可靠的方法之一。主要通过对组织或细胞进行各种染色，如HE染色，甲基绿—派诺宁染色，Giemsa染色，在光学显微镜下观察；用荧光染料如吖啶橙，Heochst33258染色，在荧光显微镜下观察；或制成超薄切片用电子显微镜观察，可以区分细胞凋亡与坏死。 （二）生化特征检测 细胞凋亡最显著的生化特征是:依赖于Ca2+、Mg2+的内源性核酸酶被激活后，将细胞核染色体从核小体间断裂，形成长短不一的核酸片段后，再用琼脂糖凝胶电泳便可以检测到DNA梯形带，此法具有很高的特异性和敏感性，为凋亡的研究提供了强有力的工具和手段。 （三）流式细胞仪检测法 此法有其他方法不可比拟的优越性，他既可以定性又可以定量，而且具有简单、快速和敏感等优点，通过流式细胞仪将细胞分类后还可以作进一步的形态学和生化特征性分析。 其检测原理是根据凋亡引发的在细胞结构、亚细胞结构和分子水平上所发生的特征性改变，造成染色体荧光染料对凋亡细胞DNA的可染性发生改变，以及细胞形态的改变影响了光散射特性。 四、细胞凋亡研究发展远景 一.细胞凋亡发生机制 流式细胞仪原理 散点图 流式细胞仪测定细胞凋亡的散点图 TNF （100、300、500 IU/ml）诱导L929 细胞14h, Annexin V-FITC/PI 标记细胞 2003.7.25 流式细胞仪测定细胞凋亡的散点图 TNF （100、300、500 IU/ml）诱导L929 细胞14h, Annexin V-FITC/PI 标记细胞 2003.7.29 流式细胞仪测定细胞凋亡的直方图 TNF （100、300、500 IU/ml）诱导L929 细胞14h, FITC-DEVD-FMK 标记细胞 2003.7.29 流式细胞仪测定细胞凋亡直方图 TNF （100、300、500 IU/ml）诱导L929 细胞14h, Annexin V-FITC/PI 标记细胞 2003.8.1 * * 细胞de凋亡 1987 1991 1993 1996-7 1989 1972 1977- 1982 命名为凋亡 定义死亡基因 Bcl-2的发现 发现p53—凋亡的控制者 Caspases被发现 死亡受体(TNFR,Fas/Apol-1) 细胞色素c的作用和凋亡体的形成 2000 IAPs被发现 Smac被发现 1887 染色质 1965 程序性细胞死亡 Apoptosis Apoptosis Cancer with p53 mutations(突变) hormone-dependent tumors Breast(乳腺) cancer Prostate(前列腺) cancer Ovarian(卵巢) cancer Autoimmune disorders SLE Glomerulonephritis(血管球肾炎) Viral infections AIDS Neurodegenerative dis