淇河鲫抗菌肽hepcidin基因的克隆及其表达分析Qihe crucian carp antibacterial peptide hepcidin gene cloning and expression analysis.pdf

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2017-12-11 发布于山东
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淇河鲫抗菌肽hepcidin基因的克隆及其表达分析Qihe crucian carp antibacterial peptide hepcidin gene cloning and expression analysis

MOLECULARCLONINGANDEXPRESSIONANALYSIS OFANTIBACTERjAL IN CRUCIANCARPCARASSIUSAURATUS QIHE to ADissertationSubmitted ofHenanNornal theGraduateSchool University the Fulfillmentof inPartial Requirements forthe of Degree MasterofScience By Ma Longyang Xianghui Supervisor：Prof．Kong 5 May，201 摘要抗菌肽是由生物细胞特定基因编码，经过外界条件诱导产生的一类具有广谱杀菌活性作用的多肽。近年来发现的新型抗菌肽hepcidin，在鱼类中广泛存在，主要是由生物体肝脏特异性表达的一种阳离子小分子多肽。可以抑制多种病毒、细菌、真菌和原生动物的生长繁殖，在鱼类非特异性免疫中起重要作用，同时也可以作为一种信号分子，参与机体铁代谢。 crucianCarassius 采用RT-PCR结合RACE的方法获得淇河鲫(Qihecarp 基因全长cDNA序列，并对基因序列及其编码的多肽进行了结构和系统进化分析。得 eDNA全长708 5’非翻译区到淇河鲫hepcidin bp，包含开放阅读框(ORF)258bp， f5-UTR)94 bp和3’非翻译区(3-UTR)356 bp，其中3-UTR存在1个多聚腺苷酸加尾酸的成熟肽前体，由信号肽(24个氨基酸残基)、前体肽(36个氨基酸残基)和成熟肽(25个氨基酸残基)3部分序列组成。成熟肽含有8个保守的半胱氨酸残基，通过4 个链内二硫键形成单一发卡结构，拐角处有一个特殊的二硫键，可能与hepcidin的抗菌活性直接相关。序列分析表明，与已报道的其他鱼类hepcidin相比较，核苷酸序列具有很高的序列相似性，翻译的成熟肽与其他种类生物的成熟肽进行系统进化分析，结果显示与报道的其他鱼类hepcidin具有较高的同源性，且与鲤鱼的亲缘关系最近，而与哺乳类和两栖类在不同的分支上。 mRNA表达水平，以及腹腔采用RT．qPCR的方法检测淇河鲫不同组织hepcidin 注射嗜水气单胞菌(Aeromonas mRNA表达水平最高，其次为脾脏和头肾，在显示在正