流式细胞仪检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核方法的改进.pdf

毒理学杂志2011年 1O月第25卷第 5期 JToxicolOctober2011Vo1．25 No．5 [4] 詹纯列，肖育华，李新春，等．普通级、SPF级 SD、Wistar Toxicology，2006，44(2)：147—160． 大 鼠血液生化值的测定与比较 [J]．中国比较医学杂志 ， [7] HammondB，DudekR，LemenJ，eta1．Resultsof13一 2004，14(2)：94—96． week safety assurance study with rats fed grain from [5] 张敏 ，纪晓光 ，王京燕 ．清洁级 Wistar大 鼠血常规及生化 glyphosate tolerant corn [J]． Food and Chemical 指标正常值 观察 [J]．中国消毒学杂志，2006，23(2)： Toxicology，2004，42(6)：1003-1014． l19．123． [8] 卓勤 ，陈小萍，朴建华，等．转可豆胰蛋 白酶抑制剂稻谷9o [6] HammondB，LemenJ，DudekR，eta1．Resultsof90一day 天喂养实验研究[J]．卫生研究，2OO4，33(2)：176-179． safety assurance study with rats fed grain from corn rootworm-protected corn [J]． Food and Chemical (收稿 日期 ：2011—01—12) 中图分类号：R994．6 文献标识码：B 文章编号：1002—3127(2011)05—0394—04 ·方 法 研 究 · 流式细胞仪检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核方法的改进 冯晓青，尉红，万建美，李冰燕，张增利 (苏州大学医学部公共卫生学院，江苏省放射医学与防护重点实验室，江苏 苏州 215123) 关键词：微核试验；流式细胞仪 ；小鼠 微核试验是以动植物为材料 ，利用细胞生物学方 速的小鼠骨髓嗜多染红细胞流式细胞仪检测方法 ，以 法观察其出现的微核率(micmnucleusfrequency，MNF) 进一步推动 自动化微核实验 的发展。 来表示材料受遗传损伤程度 的一种检测遗传毒物的方 法。微核试验创建于 20世纪80年代 ，由于微核实验 1 材料与方法 具有快速 、简单、灵敏 、客观的特点，目前许多国家和国 1．1 动物 健康 ICR雄性小 鼠20～25g，由苏州大学 际组织已将其规定为新药 、食 品添加剂 、农药、化妆 品 动物中心提供。许可证号：SCXK(苏)2010-2010。所 等毒理安全性评价的必做试验。 有动物在同等条件下饲养 ，自由饮水和摄食 。 传统的微核实验显微镜检测费时、费力，结果易受 1．2 试剂与仪器 环磷酰胺 (江苏恒瑞医药股份有 主观因素影响，难 以满足大量毒理学检验任务的要 限公司)，1，4哌嗪二 乙磺酸 (PIPES)，TritonX．100(均 求…。采用流式细胞仪 的微核试验 自动化检测有很 为北京 Solarbio公司)，碘化丙啶 (PI，美 国 Sigma公 多优点：(1)检测速度至少 比人工读片快 40—100倍 ； 司)，其余试剂均为 国产市售分析纯。PIPES溶液： (2)减少 了人为的主观因素；(3)使用具有分选功能的 27．75 mgCaC12+584．4 mgNaC1+346．3 mgPIPES+ 流式细胞仪，对判定为含微核的细胞，还可以分类检出 40．67mgMgC12，加双蒸水至 100ml。PIPES—PI溶液 ： 并收集在玻片上或试管里，在显微镜下检查验证，以证