紫球藻胞外多糖抗呼吸道合胞病毒RSV活性研究.pdf

辽宁·上t 奎国瘁耳生蕾技术与谆耳蠢蕾学术套诅蠢文善 2006．g．2-6 刘石生1魏东2”王一飞3 (1．海南大学海洋学院，海南省海洋生物技术重点实验室，海口，570228；2．华南理工大学轻工 与食品学院，广州，510640；3．广州暨南生物医药研究开发基地，广州，510632) 摘要：采用体外细胞培养的方法，在Hela细胞系上检测了来自紫球藻的胞外多糖及其组分的抗呼吸 道病毒(RSV)活性．发现紫球藻胞外多糖对呼吸道合胞病毒具有强烈的抑制活性，同时对宿主细胞 的抑制作用很小．分离组分中的强带电性组分EsPSⅥ活性最高，其11值达3125，为阳性对照药病毒 唑的40余倍． 关键词：紫球藻，胞外多糖，抗病毒，呼吸道合胞病毒(RSV) 呼吸道合胞病毒属于副粘病毒科肺炎病毒属【1J，为负单链RNA病毒，有包膜。RSV易导致毛细 支气管炎、肺炎或上呼吸道感染．尤以婴儿多见。临床上多采用特异性抗体进行支持疗法，或是被动 免疫治疗如采用干扰素(IFN)L驯等，或是采用广谱抗病毒药如病毒唑进行治疗。 sulfated 糖(Extracenular 近年来发现它的抗病毒特性非常突出【7““，很有希望开发成新型抗病毒制剂。海洋磺酸化多糖被证明 具有良好的抗包膜病毒的作用”“，本研究采用细胞培养法证实了紫球藻ESPS及其分级分离产物对呼 吸道合疱病毒(RSV)具有强烈的抑制作用，并且对寄主细胞无明显抑制作用。 1材料和方法 1．1试验材料 Virus，国际 Hela细胞株引自美国ATCC，实验室保存。呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytial 林注射液，Ribavirin (Porphyridiumsp．引自中国科学院海洋研究所青岛藻种库)。 1．2试验方法 1．2．1紫球藻的培养、胞外多糖及其组分分离纯化【’仉II．13I 将紫球藻在光生物反应器中连续通气、光照培养到稳定期后离心取上清，浓缩、脱蛋白处理后沉 1～nI三个 FF低压层析仪(Time003～999m，美国BioRad公司)进行分离得ESPSNVI三个 样品，采用Sephorose 分离样品．共获得7个样品，详细见文献【10；11，13】： 1．2．2病毒的培养、毒力测定 室开放基奎(shkljj050$)贵助 uIedu．cn 一通讯作者：撬东，男．博士后，Email：lewd304@sc 373 t宁．土t 奎曩辱耳t●技术乌瘁耳焉●_孽术套议论文善 2006．8．7．,-6 _(50％以上细胞发生病变作用为细胞孔)，按Reed-Muench法计算病毒毒力。 1．2．3胞外多糖对Hela细胞的细胞毒性评价 培养液吹打成单细胞悬液．计数细胞，稀释至2．5×10’细胞，mL，以100IxL／：fL接种至96孔板上，34C、 以2倍梯度稀释后加至单层细胞上．每孔100止，每个稀释度做四个平行孔，阴性对照以等量维持液 代替ESPS溶液。96孔板在34℃、5％C02培养箱中继续培养72h后，吸去上层液体，然后加入5 mg／mL 的MTT溶液10汕厨L，置34C恒温培养箱中孵育3h：吸出孔内液体，每孔加入10％SDS(w／v) 溶液100吐，在34C的恒温箱中放置8h，用酶标仪(BIO-RAD)测OD5m按ReedMuench法IIq 性浓度cc50(gg／mL)。 1．2．4多糖的抗RSW病毒活性测试、观察 CultureInfection ESPS的维持液，随即加入50HL含100TCIDso(50％组织培养感