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乙肝疫苗的生产工艺
乙肝疫苗的制备;;;乙肝疫苗的制造工艺; 目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法 反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点
①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药?物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子
②具有产物胞外分泌功?能 ,便于下游产物分离纯化;
③具有重组基因的高效?扩增和表达能力;
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的?耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工;蛋白质的分离??化;;疏水柱层析
介质： Butyl S Sepharose FF
加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析平衡液电导率相等
按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓度解析、清柱再生程序层析;;临床应用
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