RNA干扰HCCR-2基因表达对食管癌 EC9706细胞凋亡及周期的影响.pdfVIP

中华临床医师杂志( 电子版)2013 年11 月第7 卷第21 期 Chin J Clinicians(Electronic Edition),November 1,2013,Vol.7,No.21 ·9619 · ·基础论著· RNA 干扰HCCR-2 基因表达对食管癌 EC9706 细胞凋亡及周期的影响 姜琳 于鸿 孙灿林 焦霞 朱晓蔚 戴桂红 肖蔚 吴振东 林梅 黄俊星 【摘要】 目的 采用 RNA 干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2 （HCCR-2 ）对人食管癌细胞凋亡及增殖周 期的影响及其可能的分子机制。方法 采用脂质体介导将pGCsi-shHCCR-2 与pGCsi 质粒转染人食管癌细 胞株EC9706 ，经G418 筛选获得稳定抑制HCCR-2 表达的食管癌细胞模型；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR ） 及Western blot 检测转染细胞HCCR-2 、P21 、P27 mRNA 与蛋白表达；流式细胞仪检测各组细胞凋亡及增 殖周期。结果 成功构建稳定抑制HCCR-2 表达的食管癌细胞模型。反义组、空载体组和对照组细胞 HCCR-2 mRNA 表达量分别为0.19 ±0.07、0.43 ±0.22、0.45 ±0.21 ；相应的P21 mRNA 表达量分别为0.25 ±0.09、 0.12 ±0.04、0.11 ±0.05 ；相应的P27 mRNA 表达量分别为0.28 ±0.13、0.13 ±0.05、0.15 ±0.08 ；相应的HCCR-2 蛋白表达量分别为0.42 ±0.23、0.88 ±0.41、0.91 ±0.46 ；相应的P21 蛋白表达量分别为0.78 ±0.34、0.36 ± 0.15、0.35 ±0.17 ；相应的P27 蛋白表达量分别为0.81 ±0.38 、0.41 ±0.17 、0.43 ±0.24，较其他组，反义 组细胞HCCR-2 mRNA 及蛋白表达量显著降低（P ＜0.01 ），而P21 、P27 mRNA 及蛋白表达量显著增加 （P ＜0.01 ）。反义组、空载体组和对照组细胞凋亡率分别为（19.64 ±3.35 ）% 、（6.75 ±0.91 ）% 、 （6.79 ±0.98 ）%，反义组较其他组细胞凋亡显著增加 （P ＜0.01 ）；相应的G0/G1 期细胞百分数分别为 （56.58 ±11.37）%、（41.32 ±8.52 ）%、（42.65 ±8.63 ）%，反义组较其他组处于G0/G1 期细胞数显著增加 （P ＜0.01 ）。结论 下调EC9706 细胞HCCR-2 表达后，细胞凋亡增加，细胞周期出现G0/G1 期阻滞，其 作用机制与P21 与P27 表达增加有关。 【关键词】 RNA 干扰； 细胞凋亡； 细胞周期； 人宫颈癌癌基因； P21 ； P27 Inhibition of HCCR-2 gene expression in esophageal cancer EC9706 cells by RNA interference and its effect on their apoptosis and cell cycle JIANG Lin, YU Hong, SUN Can-lin, JIAO Xia, ZHU Xiao -wei, DAI Gui-hong, XIAO Wei, WU Zhen -dong, LIN Mei, HUANG Jun-xing. Department of Anesthesiology, Taizhou Peoples Hospital, Taizhou 225300, China Corresponding author: SUN Can-lin, Email: yuhongmiaomiao@163.com 【Abstract 】 Objective To investigate the effect of human cervical cancer oncogene-2 (HCCR-2) silencing by RNA interference on the apoptosis and cell cycle of esophageal cancer cell line