RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌细胞Eca-109抑制效应的体内体外表达分析.pdfVIP

《中国医学前沿杂志 （电子版）》2014 年第 6 卷第 9 期 ● 论著 ● 23 RNA 干扰 HIF-1α 对食管鳞癌细胞 Eca-109 抑制效应的体内体外表达分析 1 1 2 郭爱平 ，杭兆康 ，李苏宜 （1. 南京市六合人民医院　肿瘤内科，南京　2 11500 ；2. 安徽省肿瘤医院　 肿瘤营养与代谢治疗科，合肥　230031） 【摘要】 目的 探讨分析 RNA 干扰缺氧诱导因子 -1α （HIF-1α ）对食管鳞癌细胞 Eca-109 抑制效应的 体外及体内的表达情况。方法 选取研究用 Eca-109 细胞，设计 RNA 干扰片断 h-EGFR 构建重组质 粒 pGensil-1-EGFR 转染 目的基因片段。测定 EGFR 蛋白/mRNA 表达，挑选转染成功的基因修饰细胞 株分别植入裸鼠体内，构建移植瘤模型，且随机分为未转染组与实验组。运用免疫组化技术检测各组 裸鼠HIF-1α 蛋白表达，逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR ）技术检测各组 HIF-1α mRNA 表达，最后测 量裸鼠移植瘤的重量及体积。结果 Eca-109 中HIF-1α 蛋白伴随氯化钴浓度的升高而升高。并且 HIF- 1α 蛋白水平在缺氧后 12 小时升高，24 小时后降低，且持续减少。转染后 EGFR mRNA 的阳性表达率 P 为 26.55%、9.48%、4.60%，依次降低， ＜ 0.01。其中EGFR siRNA 水平最低。转染后 EGFR mRNA P 阳性表达率为 24.30%、34.11%、34.05%，与未转染组 （78.27% ）相比显著降低 （ ＜ 0.01）。经 RT- α P PCR 分析，实验组裸鼠EIF-1 mRNA 表达较少，与未转染组相比差异无显著性 （ ＞0.05 ）。实验组 α P 裸鼠HIF-1 蛋白表达的灰度值显著低于未转染组 （ ＜ 0.01）。接种 1 周后裸鼠均出现肿瘤，实验组 3 裸鼠移植瘤体积为 （0.20 ±0.13 ）cm ，重量为 （0.2 1±0.05 ）g，均显著少于未转染组。结论 HIF-1α 蛋白的表达与氯化钴浓度及缺氧有关，RNA 干扰缺氧诱导的HIF-1α 只发生在蛋白水平，而非基因水平， RNA 干扰技术可以成功抑制食管鳞癌细胞 HIF-1α 基因，阻碍肿瘤细胞生长、增殖，降低肿瘤恶性程度， 值得临床应用与推广。 【关键词】食管鳞癌 ；Eca-109 细胞 ；抑制效应 ；HIF-1α ；RNA 干扰 ；体外及体内表达 Analysis of RNA interference expression in vitro and in vivo inhibitory of HIF-1α on esophageal squa- mous carcinoma cell line Eca-109 1 1 2 GUO Ai-ping , HANG Zhao-kang , LI Su-yi (1.Department of Internal Medicine, Nanjing Liuhe Peoples Hospital, Nanjing 211500, China; 2.Department of Nutrition and Metabolism, Anhui Tumor Hospital, Anhui 230031, China) Corresponding author: GUO Ai-ping, E-mail: guoaipinggap@163.com Abstract Objective To study the