高效液相色谱外标法 测定碳酸饮料中苯甲酸-实验课程教材.ppt

实验十七 高效液相色谱外标法测定碳酸饮料中苯甲酸 实验目的 了解Agilent高效液相色谱仪外标法定量测定饮料中苯甲酸的操作方法。 实验原理 苯甲酸是广泛使用的食品防腐剂之一，我国的食品添加剂使用卫生标准GB2760-1996中规定，在碳酸饮料中苯甲酸的最大使用量为0.2g / kg。反相高效液相色谱可用于各种食品中的苯甲酸分离检测，当流动相为甲醇：0.02mol/L乙酸铵（5%：95%）、检测波长230nm时，用标准物质的保留时间定性，可很快检测出测试溶液中的苯甲酸，以色谱峰面积的外标法能准确测定此种物质的含量。在用高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸时，必须先进行脱气，以避免将二氧化碳气体引入色谱柱干扰测定。 主要仪器和试剂 Agilent高效液相色谱仪，Hypersil ODS-C18柱（5μm，4.6×100mm），MWD检测器，50μl 微量注射器。超声波清洗器。 甲醇（分析纯）。0.02mol／L乙酸铵溶液。 100μg/mL苯甲酸标准溶液。 样品测试溶液：市售碳酸饮料。 所用溶液均在使用前经滤膜（0.45μm）过滤。 色谱条件：柱温25℃； 流动相：甲醇∶0.02mol／L乙酸铵溶液 = 5∶95； 检测波长：230 nm； 流速：1.0 ml／min； 进样量：20μL。 实验步骤 （1）取市售碳酸饮料约10mL于50mL烧杯中，超声波脱气30min后，准确吸取1.00ml，经滤膜（0.45μm）过滤滤入10mL比色管，以经滤膜（0.45μm）过滤的高纯水定容于5mL。 （2）用100μg/mL苯甲酸标准溶液分别配制10.0、25.0、50.0μg/mL苯甲酸工作溶液（水溶液）。 （3）开机，打开色谱工作站。 （4）打开脱气阀，以5mL/min流速对流动相进行脱气。 （5）脱气完毕后，调节流动相流量为1.0mL/min，切换脱气阀，打开柱温控制开关，打开UV检测器开关。按色谱条件设置相应参数。 （6）待基线平衡后，分别用苯甲酸工作溶液进样20μl，制备外标法校正曲线。 （7）进样20μl样品测试溶液，得到的色谱图由校正曲线确定样品中苯甲酸的含量。 （8）实验结束后，在傍路条件下，先后分别以水和甲醇冲洗进样口数次。 （9）在流动相流量为1.0mL/min的条件下，先以水清洗色谱柱20min，再以甲醇清洗色谱柱10min。 （10）关闭色谱工作站，关机。 思考题 （1）外标法定量与内标法定量有何差别？ （2）为何要冲洗色谱仪进样口？ * * *