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铍试剂!线性扫描伏安探针法测定蛋白质-应用化学
第 卷 第* 期 应 用 化 学 7/K8 M/8 *
$$= 年* 月 ! ! ! :’OM;9; WGL2MB GZ RRBO;T :’;[O9\2]! ! ! [J,8 $$=
铍试剂 线性扫描伏安探针法测定蛋白质
!
! , # ! !
孙! 伟 ! 韩军英 ! 焦! 奎 ! 陆路德
!
(青岛科技大学化学与分子工程学院! 青岛##$% ;南京理工大学化工学院! 南京)
摘! 要! 根据在’ ( %) * 的+,-../012/3-04/0(+12 )缓冲溶液中铍试剂 与蛋白质能够反应生成稳定的超分
!
子复合物,使铍试剂 在5 $) %6 7(#$ 8 9:; )处的伏安还原峰峰电流下降而峰电位基本保持不变的性质,建立
!
了蛋白质的二阶导数线性扫描伏安测定方法。在最佳条件下,峰电流的下降值同人血清白蛋白(’9 )的浓度
在=) $ =$) $ ?@A B 范围内呈线性关系,线性回归方程为 %C (0 )( %D) 6* E *) #= (?@A B ),( $) DD# # 。此法
!
应用于实际人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝F1=$ 光度法一致。
关键词! 蛋白质,铍试剂 ,线性扫描伏安法
!
中图分类号:G#=H 8 I! ! ! ! ! 文献标识码:! ! ! ! ! 文章编号:I$$$1$=I6($$= )$*1$%1$%
蛋白质常见的分析方法有染料结合光度法、荧光法、光散射技术等[I = ]。生物大分子的电化学行为
研究及电分析测定是近年来的研究热点,它具有操作简单、快速、干扰小、灵敏度高等特点,本课题组采
用小分子探针研究蛋白质并应用于蛋白质的电化学测定[# 6 ],已取得了较好的结果;但用铍试剂 作为
!
电化学探针测定蛋白质的研究尚未见报道。铍试剂 是一种偶氮结构的生物染色剂,其分子结构中含
!
有大的亲水基团如磺酸基团等,易溶于水,已被用于光度法测定蛋白质的研究[D ]。实验发现,在酸性条
件下铍试剂 与蛋白质发生结合反应生成稳定的超分子复合物。本文采用电化学分析的手段对该结合
!
反应进行了研究,优化了反应条件,所建立的方法可应用于常见蛋白质的测定,用于健康人血清样品中
蛋白质含量的测定,结果令人满意。
! 实验部分
!8 ! 试剂和仪器
人血清白蛋白(’9 ,9-@?J 公司),牛血清白蛋白(+9 ,9-@?J 公司),牛血红蛋白(+’3 ,天津市川
叶生化制品有限公司);蛋白质标准溶液均为水溶液,% U 冰箱保存。I) $ V I$ 5 * ?/KA B 铍试剂 储备液,
!
使用时再进行稀释;$) ?/KA B +,-../012/3-04/0(+12 )系列缓冲溶液;考马斯亮蓝F1=$ (上海化学试剂
站分装厂进口分装);正常人血清样品(青岛科技大学校医院提供)。所用试剂均为分析纯,试验用水为
二次石英蒸馏水。WR1*$* 型极谱分析仪(成都仪器厂),三电极系统:滴汞电极为工作电极,饱和甘汞电
极(9:; )为参比电极,铂丝电极为对电极;:J,X =$ ,/3Y 型紫外可见分光光度计(澳大利亚7J,-J0 公
司);’91= 型酸度计(上海雷磁仪器厂)。
!8
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