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dna的生物合成-物理化学
教学内容 时间
第十章???? DNA的生物合成
? 遗传信息从亲代DNA传递到子代DNA分子上,称为复制,这是生物体内高分子的聚合过程,即DNA的生物合成。
第一节 复制的基本规律
一、半保留复制
(一)半保留复制的定义
复制时,母链的双链DNA解开成两股单链,各自作为模板指导子代合成新的互补链。子代细胞的DNA双链,其中一股单链从亲代完整地接受过来,另一股单链则完全重新合成。由于碱基互补,两个子细胞的DNA双链,都和亲代母链DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制(semi-conservative replication)。
(二)半保留复制的实验依据
把细菌放在含15NH4Cl的培养液中培养若干代,分离出的DNA是含15N的“重”DNA,密度比一般含14N的DNA高。用密度梯度离心法,15N-DNA形成的致密带位于普通14N-DNA所形成的致密带的下方。
把含15N-DNA的细菌放回含普通的NH4Cl培养液中培养。细菌在营养条件充足时,20分钟就可以生长成新一代。提取子一代的DNA再作密度梯度离心分析,发现其致密带介于重带与普通带之间,看不到有单独的重带或普通DNA带。
实验结果说明:子一代DNA双链中有一股是15N单链,而另一股是14N单链。前者是从亲代接受和保留下来的,后者则是完全新合成的。密度梯度离心实验,完全支持半保留复制的设想。
含15N-DNA的细菌在普通培养液中继续培育出子二代,其DNA则是中等密度的DNA与普通DNA各占一半这也进一步证明复制是采取半保留式的。实验还可按子3代、子4代……进行下去,15N-DNA则按1/8、1/16…¨的几何级数逐渐被“稀释”掉。
(三)半保留复制的意义
1、使亲代DNA所含的信息以极高的准确度传递给子代DNA分子。
2、DNA通过复制和基因表达这两种主要功能,决定了生物的特性和类型并体现了遗传过程的相对保守性。
遗传的保守性,是物种稳定性的分子基础,但不是绝对的。
二、双向复制
(一)双向复制的定义
复制时,DNA从起始点(origin)向两个方向解链,形成两个延伸方向相反的复制叉,称为双向复制(bidirectional replication) 。
(二)原核生物的双向复制
环状DNA,从一个复制起始点开始,向两个相反方向延伸形成两个复制叉。
(三)真核生物的双向复制
真核生物每个染色体有多个起始点,每个起始点产生两个移动方向相反的复制叉,复制完成时,复制叉相遇并汇合连接。
习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。
三、复制的半不连续性
DNA双螺旋的两条链是反平行的,而DNA合成的方向只能是5’→3’ 。
在DNA复制时,1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同,可以连续复制,叫作领头链(leading strand);而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反,不能连续复制,只能分成几个片段(冈崎片段)合成,称之为随从链(lagging strand)。
领头链连续复制而随从链不连续复制,就是复制的半不连续复制。
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?复制方向与解链方向不一致可以理解不连续复制的成因
四、复制的高保真性
DNA复制的精确度极高,误差率很低,以保证物种在维持遗传保守性的同时,还要通过变异不断进化。
DNA复制的高度忠实性至少要依赖三种机制:
1、遵守严格的碱基配对规律;
2、DNA聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能;
3、复制出错时,DNA聚合酶的即时校读功能。
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第二节 DNA复制的酶学
一、复制的化学反应
(一)复制的反应体系
1.底物:四种 dNTP:dATP 、dTTP、dGTP、 dCTP
2.聚合酶:依赖DNA的DNA聚合酶,DNA-pol;
3.模板:指解开成单链的DNA母链;
4.引物:提供3’-OH末端,使dNP可以依次聚合;
5.其他酶和蛋白质因子。
(二)复制的化学反应
在聚合酶的作用下,一个核苷酸 5′-P和相邻的核苷酸上核糖的3 ′-OH生成磷酸二酯键而逐一聚合的形成多核苷酸链。
(dNMP)n+dNTP→(dNMP)n+l + ppi
DNA链生成过程,DNA 新链生成需引物和模板; 只能从5′-端向3'-端延长。
二、参与复制的主要酶类
(一)DNA聚合酶
全称:依赖DNA的DNA聚合酶(DDDP) 缩写:DNA-pol
活性: 1. 5((3( 的聚合活性 2. 核酸外切酶活性
1.原核生物的DNA聚合酶
DNA-pol I 、 DNA-pol II 、 DNA-pol Ⅲ;
(1)DNA聚合酶Ⅰ:
①结构特点:
单一多肽链,从N端到C端有3个酶促活性结构域依次排列:
5′→3′外切酶、3′→5′外切酶和DNA聚合酶。
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