大叶黄杨组织培养.doc

大叶黄杨组织培养 中南林业科技大学 生命科学与技术学院 09生物技术2班 组员：唐清政、李秀菊、易文国、徐增海 指导老师：韩文军 大叶黄杨组织培养 1. 综述 大叶黄杨易于人工修剪塑性，是一种很好的美化环境的常绿灌木。现在一般利用扦插技术进行大叶黄杨的繁殖扩增，而用于扦插的部分一方面体积较大，另一方面难于进行消除处理，这就容易造成病变的积累，最终导致植物品质的下降。如果通过植物组织来进行大叶黄杨的繁殖扩增，可以得到高品质的苗木，这就降低了需要进行病虫害防治的概率，理论上为城市绿化降低经济成本和劳力成本。 我们利用茎尖、和作为外植体，在不同的培养基上诱导产生愈伤组织、从生芽和根，完成植株再生。[1]研究表明：在诱导培养阶段,较低浓度的细胞分裂素能促进大叶黄杨茎段侧芽的萌发,其适宜的诱导培养基为MS+BA0.5 mg/L;继代增殖阶段,以MS+BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+GA32.0 mg/L为培养基效果较好;生根阶段,最适宜的培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg/L[2] 《金心大叶黄杨组织培养技术体系建立及叶片颜色变化研究茎段启动培养中以MS+BA4.0 mg/L+TDZ0.05～0.1 mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.01 mg/L+蔗糖3%为较适宜培养基配方组合,其出芽率为75.84%,出芽指数为2.57。叶片培养以MS+IBA0.1 mg/L++TDZ0.05 mg/L组合最好。4月为取材的最佳季节。茎段作为外植体比叶片更为合适。[] 综合参考，外植体选择及消毒阶段，用于消毒的升汞溶液浓度为0.1%，消毒时加入表面张力消除剂；愈伤组织诱导培养基pH值为6.2，蔗糖浓度为3%；根的诱导阶段，培养基为1/2 MS，加入了浓度为0.5%活性炭。在以上条件下，我们预期6BA浓度为2.0mg/L，外植体为带芽茎段，NAA的浓度为0.5 mg/L的组合组织培养效果最好。 2. 关键词 大叶黄杨、组织培养、培养基、愈伤组织、激素 3. 实验步骤 3.1 MS培养基的配制 按照MS培养基的配制步骤配制大量元素，微量元素，有机溶剂。注意铁盐，钙盐单独配制。[4] 3.2 MS培养基配制 按大量元素，微量元素，有机溶剂的顺序依次加入规定数量加入到1L烧杯中。然后加入30g蔗糖，7.5g琼脂粉加入3/4的蒸馏水。放到电炉上面加热直到琼脂粉完全溶解。然后假如蒸馏水至刻度。[5] 3.3 培养基的分装 每个三角瓶加入20ML左右的培养基，迅速用1mol/l的HCL或1mol/l NAOH 调pH。然后迅速用封口膜封装。 3.4 培养基，培养皿，无菌操作纸，无菌水灭菌 将培养基，培养皿，卫生纸，包装好的培养皿放到高压灭菌锅中121℃灭菌15 ~20min。[6]灭菌完以后如果培养基凝固就放好以备接种。如果不凝固则重做。培养基的保质期为10天。 3.5 外植体的选择 在植物培养的初始阶段,不同外植体的表现不一样,有时甚至直接影响组培的进度,因此有必要首先进行外植体的筛选。从理论上讲,植物细胞具全能性,任何部位均能在合适的条件下成功地进行培养。但实际上不同的外植体,其分化和形态发生能力各不相同。[7]本组利用大叶黄杨的茎尖、带芽茎段、叶片作为外植体。外植体从生长健壮、无病虫害的植株或是新抽出的嫩枝上采集。 3.6 外植体的消毒处理 取不同种类的外植体，用软毛刷或棉球蘸清水用自来水冲洗，在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，清洗干净，再用镊子或解剖刀除去部分鳞片、茸毛，在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用0.1%升汞浸5min。消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触最后用无菌水冲洗3~5次。[8] 3.7 基本培养基的选择 植物组织培养成功与否,除培养材料本身的因素外,其次就是培养基。培养基的种类、成分直接影响培养材料的生长发育,故应根据培养植物的种类和部位,选择适宜的培养基。[9] 目前用在植物组织培养中的培养基有MS、B5、H、Monnior等,但应用最广泛的还是MS培养基,或是在此基础上稍做改动。[10] 3.8 植物生长调节剂 在植物组织培养中，各种激素的比例及绝对含量不同，对组织培养的影响不同，同时激素的作用还受外界环境条件的影响情况比较复杂。[11]因此，在大叶黄杨的组织培养中，只有根据不同的培养目标，通过反复实验，合理使用激素，才能得到较好的结果。 3.9 培养条件 诱导培养基：MS+不同浓度的6-BA进行诱导侧芽的生长试验（琼脂为0.75%[12]，灭菌条件为0.11MPa，12