转座子质粒遗传重组ppt课件.ppt

第三章 ;主要内容;第一节 转 座 子;一、转座子的分类和结构特征;2、复合转座子—— Ⅰ类转座子 ——由IS类转座组件构成的复合体。;4、转座噬菌体——Ⅲ类转座子;（二）真核生物转座子的类型：; 转座子的共同特点： ① 两端有反向重复序列 ② 转座后靶位点是正向重复 ③ 编码与转座有关的蛋白——转座酶 ④ 可以在基因组中移动;二、转座子机制;（二）转座子的复制过程;（三）转座作用模型Ⅰ——对称模型 ;（四）转座作用模型Ⅱ——非对称模型 ;三、转座效应;3、异常转座的效应： 异常转座包括：一端转座； 部分转座 隐藏位点转座 协同转座 倒位转座;5、转座子作为研究工具： 主要用于如下研究： ① 基因传送载体 ② 结构重组 ③ 基因表达 ④ 基因突变 ⑤ 克隆 ⑥ 基因作图;四、原核生物和真核生物的转座子;IR;3、转座噬菌体;G片段携带两种不同基因： G（＋）取向时，基因 S 和 U 表达； G（－）取向时，基因 S′和 U′表达。;（二）真核生物的转座子;3、非病毒返座子：;4、玉米调控元件： 是真核生物中首先被发现的转座子。;五、逆转录病毒和逆转录转座子;1、逆转录病毒基因组与逆转录转座子结构;2、逆转录病毒与转座;3、逆转录病毒与转导;第二节 质 粒;质粒（plasmid）;一、质粒的遗传学类型;3、col 质粒：含有合成大肠杆菌素基因的质粒， 能杀死不含大肠杆菌素的亲缘细菌。;二、质粒DNA的特性;2、松弛型质粒的复制： 在整个细胞周期中随时都可进行复制。 需用DNA polⅠ的存在。 在细胞内有10～200个以上, 甚至多达数千个。;（二）质粒的不相容性;图 质粒转移过程 p75;（四）质粒中的选择性标记;三、特殊细菌质粒;（二）R 质粒——耐药性质粒;四、真核生物中的质粒;常用质粒;pBK-CMV;pEGSH;pSG5;pUC18/19;pWE15;能自主复制，有一个复制起始点； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组 体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有 多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。;第三节 遗传重组;遗传重组的类型：;一、同源重组 （homologous recombination）;普遍公认的是1964年提出的Holliday模型，该模型于1975年得到改进：;片段重组体——基本无重组发生： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。; 内切酶 (RecBCD);Holiday中间体;3、同源重组的酶学;图 RecBCD 作用机制 p83;（2）Rec A 的作用：;（4）Ruv C 的作用：;4、同源重组的主要途径;二、位点特异性重组： （site-specific recombination ）; 位点特异性重组与同源重组的区别： ① 同源重组中DNA链的切断是完全随机的； 位点特异性重组是在某些特异的DNA 序列处发生重组。 ② 同源重组后染色体内的DNA序列一般仍按 原来的顺序排列； 位点特异性重组中DNA节段的相对位置 发生了移动，即DNA序列发生重排，从而得 到不同的结果。;（一）λ噬菌体DNA对E.coli 的整合;; λ噬菌体的整合作用有两个特点： ① λDNA和宿主DNA的交换是可逆的， 原先存在的DNA序列全部被保存下来，并 无丢失。 ② 噬菌体和细菌的DNA之间有一段很短的 同源序列，重组交换必须通过其中的一个 特定的核苷酸。;2、λ噬菌体整合的分子机制：; λ噬菌体的切除需要三种蛋白： ① 整合酶（integratase，Int）： ② 整合宿主因子（IHF）： ③ 切除酶（excisionase，Xis）：Xis和Int结合形成复合物，作用于BOP′和POB′位点，促进两者之间的相互作用和重组。; 酶蛋白作用的特异性： ① Int、IHF只能在attP （POP′）上形成整合 体，再