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南药巴戟天毛状根诱导条件优化的研究 　　摘要 为探索巴戟天毛状根的诱导条件，该研究选择不同发根农杆菌ATCC15834、AR10、Msu440菌株诱导巴戟天无菌苗的幼芽、叶片、叶柄、茎段等外植体形成毛状根，并研究了共培养时间和乙酰丁香酮（AS）浓度等因素对巴戟天毛状根转化率的影响。结果表明：巴戟天毛状根的最佳诱导条件为：以幼芽为外植体，ATCC15834为转化菌，侵染时间20 min，并在培养基中添加300 μmol/L乙酰丁香酮条件下，巴戟天毛状根的诱导转化率最高，可达36.7%。 　　关键词 巴戟天；毛状根诱导；发根农杆菌 　　中图分类号 S567.53；Q943.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）10-0077-02 　　Abstract To establish the inducement conditions for hairy roots of Morinda officinalis How，Agrobacterium rhizogene strains of ATCC15834，AR10，Msu440 were selected to induce the transformation ration of explants of buds，leaf，leafstalk and stem of Morinda officinalis How aseptic seedling into hairy root.The effect of infection time and concentrations of acetosyringone（AS）on the transformation ratio were also studied in this paper.The results showed that the better conditions for inducing hairy roots was as follows：young buds as explant，infected by strain ATCC15834 for 20 min and then cultured in MS with 300 μmol/L acetosyringone，in this conditions，the inducting rate reached 36.7%. 　　Key words Morinda officinalis How；hairy roots inducement；Agrobacterium rhizogene 　　巴戟天（Morinda officinalis How）是一种茜草科植物，其肉质根被广泛用于补肾壮阳、治疗不孕不育、风湿痹痛类中成药，为“四大南药”之一。现代药理研究表明，其中的多种活性物质具有抗骨质疏松[1]、消炎镇痛[2-3]、抗抑郁[4]、抗疲劳[5]、促进血管生成[6]等作用，所以以巴戟天作为资源开发新药品种具有广阔的前景。巴戟天为传统的中药，其功效也被海外医药界所认可，出口量也在逐年增加。另外，巴戟天在中国南方地区和港澳地区还作为一种常用的食疗补品，也有部分用于加工即食蜜饯。药、食、补多种消费途径造成市场对巴戟天的需求不断增加。 　　我国巴戟天野生资源极少[7]，目前巴戟天商品药材为来源于广东、福建、广西等地的栽培品，其中广东巴戟天产量占全国巴戟天总产量的90%以上[8]。基于防止水土流失和改善生态环境，巴戟天主产地广东高要、德庆、封开、郁南、广宁等地均对坡地种植巴戟天进行了限制[9]。另外，巴戟天生长周期长（3～6年），病虫害的风险大，也影响了药农的种植积极性。由此，巴戟天的种植面积正在不断缩小。栽种面积的减小和市场需求的增加势必造成巴戟天资源短缺，限制巴戟天产品深度开发。植物毛状根培养技术是获得具生物活性的植物次生代谢产物的新途径，本研究利用发根农杆菌的遗传转化技术，通过对毛状根诱导条件的优化，建立巴戟天毛状根诱导和培养方法，为巴戟天毛状根培养生产次级代谢产物进行前期探索。 　　1 材料与方法 　　1.1 发根农杆菌菌液制备 　　分别取保存的发根农杆菌ATCC15834、AR10、Msu440菌液10 μL，将其稀释10-6倍后涂于YEB琼脂培养基上，28 ℃活化2～3次，将活化菌种接入YEB液体培养基，100 r/min黑暗振荡培养2 d后，将菌液稀释至OD600=0.6左右，用于感染外植体。 　　1.2 毛状根的诱导 　　取自巴戟天无菌苗[10]的不同外植体（幼芽、茎段、叶片、叶柄用无菌解剖刀切成0.5 cm小块）接种到添加乙酰丁香酮（浓度分别100、200、300、500 μmol/L）的MS培养基中，于黑暗条件下，2