如免疫抑制法测定CK-MB酶活性.PPT

急性肝炎时血清ALT高低与临床病情轻重相平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如能同时测定AST，并计算AST／ALT之比，则对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也特别有价值。急性肝炎时比值<1，肝硬化时比值≥2，肝癌时比值≥30． 　　重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT逐渐下降，而胆红素却进行性升高，出现所谓“酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。 　　AST主要存在于心肌，以往多用于AMI的诊断。AMI发病6～8h即升高，48～60h达到高峰，4～5d恢复正常。但由于AST在AMI时升高迟于CK，恢复早于LD，故诊断AMI价值不大。在急性肝炎时，AST虽亦显著升高，但升高程度不及ALT，而在慢性肝炎，特别是肝硬化时，AST升高程度超过ALT。胆道疾患时AST亦可升高。 　　临床上血清ALT、AST表现为轻度增加的有胰腺炎、乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤；中度增加的有传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死；重度增加的有病毒性肝炎、中毒性肝炎等。肝硬化、慢性活动性肝炎和心肌梗死常有AST>ALT。 　　二、γ-谷氨酰转移酶及其同工酶 　(一) 生物化学特征 γ－谷氨酰转移酶(γ-GT或GGT)又称γ-谷氨酰转肽酶，是一种线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。 　　血清中的γ-GT则主要来自肝胆，红细胞中几乎无γ-GT，因此溶血对其测定影响不大。γ-GT催化γ-谷氨酰基从谷胱甘肽(GSH)或其他含γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上。 (二)测定方法 γ-GT的测定方法有数种，目前国内外多采用连续监测法测定血清γ-GT活性。 　　IFCC参考方法采用L-γ-谷氨酰-3-羧基—对硝基苯胺作为底物，以甘氨酰甘氨酸(双甘肽)作为γ-谷氨酰基的受体。在pH7.7的条件下，γ-GT催化底物生成γ-谷氨酰双甘肽和黄色的2—硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波长处直接连续监测，吸光度的增高速率与γ-GT活性成正比关系。 (三)临床意义 γ-GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。胆道疾病如胆石症、胆道炎症、肝外梗阻时，γ-GT不仅阳性率高，而且升高明显。肝实质疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化时γ-GT一般只是中度升高(ULN的2～5倍)，这点有助于肝胆疾病的鉴别诊断。 若ALP升高而γ-GT正常可完全排除ALP的肝来源，若ALP和γ-GT均增加，则应先排除肝外引起γ-GT增加的原因，一旦排除，则γ-GT增高即为肝病所致。 γ-GT还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移，肿瘤患者如有γ-GT的升高，常说明有肝转移。 γ-GT与乙醇的摄取量有关，饮酒时，由于乙醇对肝细胞线粒体的诱导导致γ-GT活性升高，故对乙醇性中毒的判定有相当的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有γ-GT升高。 用醋纤膜电泳可将γ-GT同工酶分为γ-GTl、γ-GT2、γ-GT3和γ-GT4 四种，正常人只见γ-GT2和γ-GT3。重症肝胆疾病和肝癌时常有γ-GTl出现，乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有γ-GT2增加，胆总管结石及胰腺炎时γ-GT2也增加。γ-GT4与胆红素增高密切相关。 三、肌酸激酶及其同工酶和亚型 (一)生物化学特性 肌酸激酶(CK) 催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间的磷酸转移的可逆性反应，所产生的磷酸肌酸含高能磷酸键，是肌肉收缩时能量的直接来源。CK广泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑。 CK是由M和B两类亚基组成的二聚体。在细胞质内存在3种同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在细胞线粒体内还存在另一CK同工酶，即所谓线粒体CK(CK-Mt)，也称CK4。各种CK同工酶还可进一步根据所带电荷和等电点不同分离数目不等的亚型。 (二)测定方法 CK的测定方法以酶偶联法最常用，是CK的参考方法.有两种工具酶及指示酶参与反应。原理如下： CK 磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP HK ATP + 葡萄糖 6-磷酸葡萄糖 + ADP 　G6PD 6-磷酸葡萄糖 + NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸盐 + NADPH +H