人教版高中生物选修1 血红蛋白的提取和分离 第1课时名师公开课省级获奖课件.ppt

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和CO2的运输。在本课题中，我们将以血红蛋白为实验材抖，学习蛋白质提取和分离的一些基本才技术。 一、基础知识 （一）凝胶色谱法（分配色谱法） 根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 凝胶是一些微小的多孔球体，由多糖类化合物（如葡聚糖、琼脂糖等）构成。 凝胶粒 分子量 大 小 直径大小 大于凝胶颗粒空隙直径，被阻挡在颗粒的外面 小于凝胶颗粒空隙直径，可以进入颗粒内部 运动方式 垂直向下移动 垂直向下移动，无规则扩散进入颗粒内部 运动速度 较快 较慢 运动路径 较短 较长 洗脱次序 先从凝胶柱洗脱出来 后从凝胶柱洗脱出来 （二）缓冲溶液 1.概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 2.作用：能够抵制外界的酸或碱的对溶液的pH值的影响，维持pH基本不变。 3.缓冲溶液的配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。 ①弱酸和弱酸盐组合 H2CO3/NaHCO3 CH3COOH/CH3COONa 4.缓冲溶液的组分分类 基础知识　　　　　（二）缓冲溶液 ②弱碱和弱碱盐 ③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐 NH4OH /NH4CI NaH2PO4 /Na2HPO4 KH2PO4 /K2HPO4 1.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2.原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 3.电泳的类型： 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （三）电泳 阳极（+） 阴极（—） 带正电的离子 带负电的离子 电泳原理示意图 带电性质以及分子大小，形状的不同分子迁移速度不同，从而实现样品中各种分子的分离。