金心大叶黄杨组织培养技术体系建立及叶片颜色变化研究-森林培育学专业论文.docxVIP

摘要本研究以金心大叶黄杨(Evonymus 摘要 本研究以金心大叶黄杨(Evonymus iaponica L．1iar．aureovariegatus Reg)的茎 段和叶片为外植体进行组织培养技术体系的建立及根诱导分化机理研究。通过正 交试验设计并结合方差分析和多重比较，探讨了金心大叶黄杨离体培养的最佳培 养基配方及培养程序，并在此基础上着重研究了根分化过程中过氧化物酶 (POD)、多酚氧化酶(PPO)活性变化。在培养过程中发现叶片颜色发生变化， 通过设定不同的培养条件，测定花青素、叶绿素、类胡萝h素的含量，找出其变 化规律，其试验结果表明： (1)茎段启动培养中以MS+BA4．0 mg／L+TDZ0．05～0．1 mg／L+IBA0．1 mgtL+NAA0．01 IT*趴』蔗糖3％为较适宜培养基配方组合，其出芽率为75．84％， 出芽指数为2．57。叶片培养以MS+IBA0．1 mg／L++TDZ0。05 mg／L组合最好。4月 为取材的最佳季节。茎段作为外植体比叶片更为合适。 (2)继代培养中，丛生苗增殖途径有两种方式：腋芽发生型(A型)和愈伤组 织发生型(B型)。A型丛生苗增殖培养适宜培养基配方为：MS+BAl．0 mg／L+NAA0．1 mg／L+IBA0．5mg，L+蔗糖3％，月增殖倍数达3．6，有效苗数2．4。 B型丛生苗增殖培养适宜培养基配方为：MS+BA2．0 mg／L+NAA0．1 mg几十IBA0．01 mg几十蔗糖3％，月增殖倍数达5．2，有效苗数为3．6。其继代周期 为30 d，继代次数为4代比较适宜。 (3)生根培养中以1／2MS+IBA0．5mg，L+NAA0．1 mg／L+蔗糖15％+活性碳0．59／ L为较适宜培养基配方组合，其生根率为87．2％。瓶外扦插生根以200mg／L IBA+200mg／LNAA处理最好，生根率可以达到30．2％。 (4)炼苗以蛭石25％+珍珠岩25％+河沙50％混合炼苗成活率最高，达到85％， 且植株长势良好。 (5)在生根诱导过程中POD和PPO活性的变化研究发现：对于POD的活性瓶 外生根整个过程中均低于瓶内生根，瓶内生根的POD活性一直上升，而瓶外生 根在整个生根过程中活性先上升然后下降最后又上升。对于PPO活性瓶外生根 整个过程都稍高于瓶内生根，其活性都是先下降后上升。 (6)在不同的培养条件下叶绿素a的含量都高于叶绿素b和类胡罗卜素，受培 养条件影响不大。叶绿素b和类胡萝h素含量不同培养条件下含量都相对较低， 且受光照时间的显著影响。花青素在不同培养条件下含量都为0。 关键词：金心大叶黄杨； 组织培养；POD；PPO； 叶绿素； 类胡萝h 素 Study Study on technique system oftissue culture in Evonymusjaponica L．Var． aureovariegatus Reg．and color variation of blade Yah Zhigang (college ofForestry and Horticulture-SichuanAgricultural University，Ya’an，Sichuan625014：) Abstract Shoot organogensis culture in vitro and plant regenerated from sproms explants of Evonymus japonica L．Var．aureovariegatus Reg were studied on this paper． Activities of peroxidase and polyphenol oxidiase in the development of adventitious root were discussed．content of chlorophyll and carotin and anthocyanin in the different culture condition were researched The results showed that the best medium for various stages were as follows： (1)Initial medium of stem：MS+BA4．0 mg／L_盯DZ0．05～0．1 mg，L+IBA0．1 mg／L+NAA0．01 mg／L+3％sucrose：Initial medium of laminae：MS+IBA0．1 mg／L++TDZ0．05 mg／L；Draw materials season：April． (2)Clump shoots ge